中成药中蜕皮甾酮的预分离及其高效液相色谱洁测定研究.pdfVIP

LC．99 中成药中蜕皮甾酮的预分离及高效液相色谱法测定的研究’ 帅琴秦永超“江祖成李凤廖振环 (武汉大学化学学院武汉430072) 1前言 漏芦通常指菊科植物祁州漏芦的干燥根，具有清热解毒、消痈、下乳、舒盘通脉的功 效。药理研究表明它具有明显的抗脂质过氧化作用，抗动脉粥样硬化及免疫促进作用。近 来临床研究表明，以漏芦为原料制成的中成药“金水清”具有较明显的去肾性血尿的作用“l。 据报道，其中蜕皮甾酮具有明显的药理活性作用”1。因此，开展蜕皮甾酮的分离和定量研 究具有重要意义。对甾酮类化合物的分离和测定，常采用薄层层析法和色谱法”1等，而 采用高效液相色谱法测定漏芦及其中成药中蜕皮甾酮含量的报道甚少”l。本文结合氧化铝 柱预分离手段，研究了反相高效液相色谱法测定中成药金水清中蜕皮甾酮含量的方法，获 得了满意的结果。研究结果表明，该方法灵敏、准确，有良好的重现性。 2实验部分 2．1仪器与试剂 日本岛津Lc—lOAD液相色谱仪：sPD．10AV紫外．可见分光光度检测器：中成药“金 水清”由湖北省中医院研制并提供；蜕皮甾酮对照品由北京医科大学提供；氧化铝(100~200 目)：甲醇、氯仿及其它所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。准确称取适量蜕皮甾酮 对照品，加甲醇溶解配成1．09，L的溶液，用时逐级稀释至所需浓度。 2．2色谱条件 醇)：矿(水)=40：60；流速：1．0InI血ill；检测波长：248nm：记录纸速度5mm，mill。 2．3中成药样品溶液的制备 准确吸取金水清水剂5．0mL于小烧杯中蒸至小体积，加入5mL甲醇溶解，加入0．59 氧化铝拌匀，低温挥发尽溶剂，装入一根预先装填好的氧化铝柱(8mm×100mm)的顶部。 用y(氯仿)：y(甲醇)；4：1洗脱，收集洗脱液50mL，低温挥发尽溶剂，准确加入5mL甲 醇溶解，作为样品溶液。 2．4实验步骤 按照上述色谱条件，用微量注射器移取对照品溶液10 pL，进行m，Lc测定．经试 验。流动相选用矿(甲醇)：矿(水)=40：60，蜕皮甾酮与其相邻峰能良好地分开。分析试样 按同样条件测定，用外标法测定待测组分含量。 3结果与讨论 3．1色谱峰流出物紫外光谱一致性比较 对样品中所测定成分的色谱峰流出物与蜕皮甾酮对照品的色谱峰流出物，在 200~300nm波长范围作紫外吸收光谱，结果表明，2种流出物紫外吸收光谱具有良好的一 致性． ·留学人员基金资助项目 ”通讯联系人 32预分离的必要性 以漏芦为原料制成的中成药金水清成分复杂，难以直接测定其中蜕皮甾酮的含量，如 图1．a所示，其它成分干扰严重，相邻物质分离度差，得不到准确结果。实验结果(如图 l-b)表明，采用氧化铝柱预分离可以有效地除去提取物中大量的干扰组分，获得良好的峰 形和分离效果。可见，必要的预分离步骤是适宜的。 mV 2 20 州瑚 2 抛 啪 10 m 蛐 O o r—。r——T‘_1 f了百：㈦ O 4 8 12(miⅡ) 0fthe ng·lChrom-togr-msJinshuiqing wimno a．chromatogr锄oftIlc Jinshuiqingpre·separation． with