2_HPLC仪器使用和维护.pdfVIP

HPLC仪器 使用和维护 ©2011 Waters Corporation 1 从HPLC 系统基本配置说起 色谱柱 泵 进样器 检测器 工作站 ©2011 Waters Corporation 2 保障HPLC正常工作的几个要素 工作环境: — 如电源及地线,湿度,灰尘,环境温度等 化学因素: — 如溶剂质量,样品状况,色谱柱/保护柱状况等 仪器状态: — 泵,进样器,检测器,在线过滤器, 管路连接质量等 操作保养: — 正确的操作程序,完善的日常及定期保养 ©2011 Waters Corporation 3 HPLC实验的一般流程 开启HPLC系统各个设备的电源(提问:顺序很重要吗?) —打开计算机，启动Windows程序; 打开泵、自动进样器 、检测器电源，待设备通过自检后，启动色谱管理软件( 例如: Empower 2) 准备流动相 —过滤,脱气 色谱泵排气 —用新配制的流动相灌注泵 ©2011 Waters Corporation 4 HPLC实验的一般流程(续) 用准备好的流动相平衡色谱柱及色谱系统 —可在泵的控制面板上设定流速参数(15 ×5泵需在软件 控制下操作) —系统大约需平衡0.5--1小时方能稳定工作 准备样品 —用流动相溶样或重组样品 —制备空白样品 编制仪器方法,开始实验 ©2011 Waters Corporation 5 液相色谱对流动相的要求 色谱柱对流动相的要求 —过滤除去微粒 —纯度的要求 —超纯水，或用KMnO 处理过的双蒸水 4 —有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低)， 并与填料相匹配 —缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般在pH2-8)内 —缓冲液（盐）的浓度不要太高(≤100mM) —流动相对样品的溶解度 —调整有机溶剂和水的比例 —最好用流动相溶样 ©2011 Waters Corporation 6 液相色谱对流动相的要求 液相色谱仪器对流动相的要求 —与检测器匹配 —脱气 —避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统） —溶剂的粘度 —防止细菌的生长 ©2011 Waters Corporation 7 流动相的脱气 流动相脱气的目的 —使色谱泵的输液准确 —输液量均匀准确，并且脉动减小 —保留时间及色谱峰面