染色体现有架的非组蛋白、RNP和银染蛋白三者关系的电镜的研究.pdfVIP

染色体骨架的非组蛋白、RNP与 银染蛋白三者关系的电镜研究’ 董 洁“ 刘凌云 (北京师范大学生物系．北京100875) 摘要本文应用分离染色体骨架的TEM技术、超薄切片电镜细胞化学、RNase一胶体金标记和 银染电镜技术结合研究了牛肾(BK)细胞的分离染色体骨架和完整的中期染色体骨架．结果显示 垒颗粒与银颗粒在染色体中分布的位置与核糖核蛋白(RNP)所在部位恰好一致．说明RNP中的 蛋白质含有银染的酸性蛋白，即染色体骨架的非组蛋白、RNP中的蛋白部分、银染蛋白三者是一 致的。也说明在骨架中含有RNA，并且染色体骨架蛋白在自然状态下是与RNA结合成RNP的形 式存在。 关键词牛肾细胞染色体染色体骨架 非组蛋白 核糖核蛋白(RNP)银染蛋白 探索染色体骨架对搞清染色体的细微结构及其包装机制，对研究染色质纤维水平的DNA 复制转录、基因在染色体上的定位以及从染色体亚结构水平控制遗传变异都具有重要意义。多 年来，许多学者提出了不同的染色体结构模型，其中仅骨架与辐射环模型涉及染色体骨架与 and 染色质纤维的关系(Adolph“以．，1977a；Laemmli盯“．，1978；MarsdenLaemmli，1979} Paulson，andLaemmli．1 977)。同时，关于中期染色体骨架成分的研究工作已取得很大进展， (Eamshawand and Laemmli，1984；Howell Hsu，1979)三个方面进行大量深入研究。但是， 三者的关系、存在部位及其与染色质纤维的关系尚缺乏电镜下的直接证据。本工作应用电镜 细胞化学、胶体金标记、银染技术和透射电镜观察染色体中非组蛋白、RNP和银染蛋白的关 系和RNP的分布，以期了解染色体骨架的真实结构和染色质纤维的关系。 l材料和方法 1．1材料 BK(牛肾)细胞，用MEM EagIe培养液加10％～15％小牛血清进行培养。 1．2方法 1．2．1染色体骨架的制备及电镜制片 参考罗艺和刘凌云(罗艺等，1996)制备分离的BK细胞中期染色体。去组蛋白骨架参考 PauIson(1989)制备HeLa细胞中期染色体骨架的方法。 t国家自然科学基金资助课题 ¨现在首都医科大学工作 140 色素c上，用1％醋酸双氧铀染色20秒，再用90％乙醇洗涤，电镜观察。 1．2．2整体细胞的TEM染色体标本制备 将制得的细胞悬浮在o．075m01／LKcl低渗液中处理30分钟，用常规方法进行固定、脱 水、浸透、包埋、切片和染色，透射电镜HitachiH一600观察。 I．2．3银染电镜制片 网漂浮在50％硝酸银和2％明胶混合液上，室温下染色20分钟左右；染色后，将镍网漂浮在 5％硫代硫酸钠溶液上还原5分钟，重蒸水洗涤3次，空气干燥后．电镜观察。 1．2．4RNase胶体金的制备及电镜制片 参考Bendayan(1981)制备RNase胶体金方法，制成15nm的金胶液，RNase胶体金定 位的电镜制片参照Bendayan(1981)方法。 1．2．5电镜细胞化学技术 将切片用RNP优先染色法(Bemhard，1969)染色。 2结果 从图版xxⅡ：1可见TEM下分离的BK细胞染色体骨架，整个染色体骨架与染色体的整 体形态相似，可分辨出两个染色单体臂及着丝粒位置。银染的染色体骨架(图版xxⅡ：2)， 银颗粒显示了染色体骨架的非组蛋白，大量的银颗粒构成了染色体骨架形态。经RNase胶体 金标记(图版xxⅡ：3)显示的染色体骨架，可见金颗粒均匀分布于整个染色体骨架，说明 在染色体骨架上存在RNA。 色浅，中央区着色深。表明在染色体轴区分布有大量RNP，轴区周围的染色质纤维间RNP分 布较少。从银染的染色体横切面(图版xxⅡ：5)可见．银颗粒分布于整个染色体，染色体 轴区的银颗粒数目较多，从染色体轴区伸出的染色质纤维间银颗粒较少。 从我们的实验结果中看到在染色体骨架上均匀布满了金颗粒，大量银颗粒构成了染色体 骨架形态，说明银染