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一种新的医学细菌茵种保存方法的研究 路文彬 彭晓雯 吴家丽 严寒秋 (北京市卫生防疫站北京100013) 摘要本文报告医学常用的35种需氧兼性厌氧菌259株，用经典的冷冻真空干燥保存法 和一种新设计的特殊棉拭子冷冻保存法进行比较研究。在预试验中，7株嗜肺军团菌，5株淋 病双球菌和1株脑膜炎双球菌，同时用上述两法试验。通过3年的观察，特殊棉拭子冷冻保 株，淋病双球菌存活3株，肺炎链球菌存活1株，脑膜炎双球菌存活1株，因而对该15株菌有 3年的观察，新方法以直接分离，接种相应平板上，全部试验用菌株均生长良好，存活率仍为100％ (244／244)。冷冻真空干燥保存法，用直接分离，转种相应平板上有3株菌未生长，存活率为 培养法进行增殖，仍未见生长。所以冷冻真干燥保存法，最终存活率为94．98(246／259)。经 统计学分析，预试验中两法有显著性差异(p0．01)，新法优于经典法。正式试验中两法无显 著性差异(p0．05)。 医用细菌菌种保存方法很多，一般实验室常用的方法有定期移植保存法和冷冻真空干燥 保存法。我们为了探索一种简便、实用、并能较长期保存菌种的方法，在总结三十多年实践 经验基础上，提出一种新医用细菌菌种保存方法—特殊棉拭子冷冻保存法于1989年8月至1995 年6月，经预试验和正式试验，并同经典的冷冻真空干燥法进行比较，通过对细菌存活情况、 J 形式、染色、生化反应及血清学试验观察和鉴定，证实特殊棉拭子冷冻保存结果很好，现报 _ 告如下。 r- 一、 材料和方法 ” 1、 菌株：见表1，2。其中嗜肺军团菌由流研所提供：链球菌、脑膜炎双球菌、淋病双球 菌由检定所提供，其他菌株由本室提供。 2、 汤自制。 3、仪器 (1)冷冻真空干燥机：型号consol12(美国) ——一(2j (3)其他材料：特殊处理的棉拭子(用硫乙醇酸钠、氯化钙、丙酮酸钠泡制而成)、菌种 30 (4)冷冻真空干燥法，具体操作详见文献“’2’ 4、新方法—特殊棉拭子冷冻保存法 (1)将试验用菌种接种于相应的培养基上，按常规方法进行培养，并通过系统生化鉴定， 完全符合该菌定义后，方可使用。 (2)用特殊处理的无菌棉拭子，沾取菌苔，放入无菌小试管中，塞紧无菌胶皮塞，作好 标记，于．20℃冷冻保存。 布于相应平板上，划线分离，培养后，观察结果。 5、鉴定方法。每次转种，观察存活情况，革兰氏染色镜检，观察菌体形态，保存一年 鉴定及血清学鉴定。 二、结果 膜炎双球菌和2株肺炎链球菌，同时作特殊棉拭予冷冻保存和冷冻真空干燥保存，前法保存 的菌种，每月转种一次，对每次生长菌作染色镜检和血清学试验，进行证实鉴定。对经1年 生化复核鉴定，结果符合。对AMS仪不能鉴定的嗜肺军团菌，用自制生化培养基进行鉴定， 结果符合。经3年的观察，特殊棉拭子冷冻保存法，对嗜肺军团菌、淋病双球菌、脑膜炎双 球菌、肺炎链球菌，不用复苏修补培养，直接分离，便生长良好；对15株菌的存活率为100％。 而冷冻真空干燥保存法，对7株嗜肺军团菌有2株存活，其余5株菌用复苏修补培养后，仍 未见生长。对淋病双球菌、脑膜炎双球菌直接分离未见生长，复苏修补培养后分离，才见少 量生长，存活率为46．67％。 氧兼性厌氧菌