北京油鸡脂肪干细胞分离培养及生物学特性与研究.pdfVIP

2010，VOLUME12，NO．IANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETIN 35 北京油鸡脂肪干细胞分离培养及生物学特性研究 宫雪莲1，浦亚斌1，侯玲玲坨，赵倩君1，白春雨1，边艳超1，关伟军P，马月辉1‘ (1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；2北京交通大学生命科学与生物工 程研究院，北京100044) 引言 20世纪90年代，世界范围内掀起了一股干细胞研究热潮，干细胞所具有的增殖与分化 derived 特性受到越来越多研究者的关注。在诸多成体干细胞的研究中，脂肪干细胞(adipose stem cells，即ADSCs)具有取材方便、来源广泛、免疫原性弱及多向分化等诸多特性，在组 织工程学领域逐渐突显出来。目前对ADSCs的研究一般都是集中在哺乳动物上，而对禽类 ADSCs的研究报道甚少。 材料方法 出生1日龄的北京油鸡，取其腹股沟处脂肪垫，于PBS中漂洗3～5次，剪碎后用含1％BSA 的I型胶原酶37C下消化lh，完全培养基终止消化，去上清重悬沉淀细胞并按1×104细胞／ 孔的密度接种于24孔板中。分别计数P3、P5、P9代北京油鸡ADSCs连续7d的增殖情况， 绘制生长曲线。对传至第3代的ADSCs迸行CD29、CD44和CD31免疫组织化学和RT-PCR 检测。用地塞米松、B一甘油磷酸钠、抗坏血酸共同诱导ADSCs向成骨细胞分化，茜素红 染色观察结果；用IBMX、胰岛素、地塞米松共同诱导ADSCs向脂肪细胞分化，油红O染 色鉴定其成熟脂肪细胞分化能力；用碱性成纤维细胞生长凶子、p．巯基乙醇，DMSO、BHA 神经细胞的分化能力。用培养液将5一氮胞苷贮存液稀释成终浓度为10uM诱导ADSC向心 肌细胞分化并检测Desmin和MyoDl的表达。 结果 ADSCs在体外培养条件下扩增能力比较稳定，传代后细胞增殖速度变快。经3--4次传 代后即可被纯化。10代以内的细胞形态良好，为典型的长梭形，细胞生长曲线呈典型的“S” 形。免疫组化检测和RT-PCR 呈阴性。ADSCs向成骨细胞的诱导分化及鉴定：细胞逐渐聚集形成结节，对诱导7天、14 肪细胞的诱导分化及鉴定：细胞逐渐变为扁平，胞浆中出现脂滴，用汕红O鉴定ADSCs向 脂肪细胞的分化能力，脂滴为橙红色。ADSCs向神经细胞的诱导分化及鉴定：向神经细胞 诱导后，胞体拉伸，形成双极或多极形态，对神经诱导后的ADSCs进行Nestin和NSE免疫 组织化学和RT-PCR鉴定，结果呈阳性。 讨论与结论 本研究探索了禽类脂肪干细胞的培养方法，建立了最佳的培养体系。上述试验结果说明 培养的禽类脂肪干细胞具有稳定的增值能力及多向分化潜能，可为组织工程研究提供数量充 足的种子细胞。 基金项目：国家科技支撑项目(2008BADB2805)与“863”课题(2007AAl02170) ’通讯作者：关伟军，男，1966年生，教授，博导，E-maih 年生，研究员，博导，E—mail：Yuehui．ma@263．net