BHK一21细胞的悬浮驯化和其在悬培条件下.pdfVIP

BHK一21细胞的悬浮驯化及其在悬培条件下 对口蹄疫A型病毒的培养 薛英-，一，王延L2，王玉红2黄炯Ⅵ，鲁立柱z，马文戈z，夏培倍2，刘宏2，郭惠玲1，徐亚萍z (1．新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐830000；2．新疆天康畜牧生物技术 股份公司，新疆乌鲁木齐830013) 摘要：选取BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养，通过对悬浮培养的培养液、PH、溶氧，罐压，搅拌等 各种工艺条件的试验，摸索出稳定的培养条件，实现了连续传代49代。并通过接种口蹄疫A型鼠化弱病 毒，比较了单层贴壁细胞和悬浮49代细胞接种病毒后的毒价。结果显示两种培养条件下，BHK-21细胞对 口蹄疫A型病毒的培养没有明显差异。 关键词：BHK-21细胞；悬浮培养；口蹄疫^型鼠化弱毒 中图分类号：$855．3 文献标识码：A 文章编号：1005—8567(2008)01-0035—03 转瓶培养系统的核心是采用摇动或转动的圆 L生物反应器， 筒培养容器，能使细胞交替接触培养液和空气，从 培养箱，德国Hearcell产品；2．5 而使传质和传热比固定培养要好。但是转瓶培养也 日本产。 有其固有的缺点：首先其表面积有限，单位体积所 1．3方法 ． 提供的细胞生长表面积小，细胞生长密度低：其次 1．3．1 是培养时监测和控制环境条件(pH、溶氧等)受到 clone-123株生长良好的单层贴壁细胞，经0．01％ 限制；此外转瓶培养的劳动强度大，占用空间大【¨。 胰酶一0．01％EDTA消化液消化后，悬浮成终浓度为 ickml成功地大(2～5)X 为了克服这些缺点，1962年Capst 105／mL的细胞液，接种量视罐体大小及 规模悬浮培养小鼠肾细胞，标志着动物细胞大规 培养液的多少来确定[4]。悬浮营养液成分包括：81％ 模培养技术的起步。 cul- 动物细胞大规模培养(1arge—scale胺和抗生素等，然后用(8．8％)NaHCO。调pH值至 ture)的生物反应器操作模式，一般分为分批式操7．4左右，接种2．5L生物反应器，37℃，100r／m 作(batch)、流加式操作(Fed—batch)、半连续式搅拌培养。依此法传代直至49代，每代细胞离心前 取样计数并观察细胞形态。 操作(semi—continuous)、连续式操作(continu- OUS)和灌流式操作(perfusion)五种操作模式嘲。1．3．2血清含量对悬培细胞的影响试验其他 本试验采用分批式操作模式，旨在探讨各种悬 培养条件一致的条件下，将MEM培养基中的血清 含量分别调整为：2％、5％、8％、15％和20％五个浓度 浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响，进而 筛选出最佳悬浮培养条件。通过接种口蹄疫A型鼠 作为生长液，用于培养BHK一21细胞，37℃培养48 化弱毒，进行毒价测定，同时与单层贴壁细胞相比 h后，取样计数并观察细胞形态。 较，为悬浮培养细胞生产口蹄疫疫苗奠定基础。 1．3．3培养液酸碱度对悬培细胞的影响试验 1材料与方法 其他培养条件一致的条件下，将培养液的pH分别 1．1 主要试剂与材料胍M培养基，HyClone公 司产品；新生牛血清，山东劲牛公司产品；胰酶， 养48h后，取样计数并观察细胞形态。 1．3．4溶解氧对悬培细胞的影响试验其他培 HyClone公司产品；BHK一21细胞，本实验室保存；