2%2c4-二硝基氟苯柱前衍生法测定氨基酸.pdfVIP

第1。届会图有机分析学术研讨会 2．4一二硝基氟苯柱前衍生法测定氨基酸 刘鸿洲 尤瑞琛 (辐建省哑植物所省诬热带植物生理生化重点公欠实验窀，噬门361006) 关键词}IPLC 2．4一-二硝幕氟苯氯基酸柱前衍生 摘要本文报道了用2，4一二硝基氟苯柱前衍生反相连夔遮擅色．澄法测定氨菸酸·15种常见 的氨基酸可得到很好的分离。衍生物很稳定，在室温下保存两个月无明显的变化。检测极限可达 到5pmol。本法可『、蔓用于食品、药品等样品的氨慕酸测定。 一 目前，用高效液相色谱法来测定氨基酸的含量多用柱前衍生法，而最常用的衍生方法有 便，衍生物稳定，适于定量测定。但在该文中氨基酸分离效果不太理想。我们在该文的基础 上，对衍生及分离洗脱条件进行了改进，可以对15种常见的氨基酸完全分离，同时将检测 极限下降到5pmol，达到对外分析测试服务的要求。 1 仪器及试剂 作站(厦门大学化学系粱权胜开发)。标准氮基酸为BDH化学公司产品，乙腈为光谱纯。水 为双蒸水，其余试剂均为分析纯。 1．1色谱条件色谱柱：Zorbax 350nto；柱温为室温；灵敏度：0．0lAUFS；流动相A：30mmol／LNaAc，pH6。40， (含1％N，N O 1020304050，B(％)164565809060 5．7N NNaOH 管中，加入1．0ml Hcl，封口后于105℃烘箱中水解24小时，取出，用10 中和至中性，定容到5．Oml，过滤，取110Ⅱll滤液进行衍生。 0．5mol／L I．3氦基酸的衍生取1．oml含有15种氨基酸的混合标准液或样品液，加入1．Oml NaHC03，1．o由l 髓2P04溶液定容到lOml，取lOml进样。 2结果与讨论 2．1衍生条件的选择 0．5mol／L 2。1．1渊甩的含量对衍生的影响取200mgGIy，加入l-Oml I B12l t 鬻z ‘■一一 ～一 ，、乌f f·}；拿闺{’j机分析。、≯术川i，f金· 缱成比例地增加。冈此，考虑剑G1)|怂分r涮最小的氨基酸，侄衍生对，DNFBij氨壁酸璇 的比例以2：l为宦。 2．1．2衍生时间对衍生物浓度的影响衍生时问以30min为宜，此时的衍生物浓度已达到 最人值，随着时间的延K，只是增加]水解产物的浓度。 2．1．3 8．0～9．．j间。 pH值对衍生的影响在pH pH值对衍生物浓度的影响不人．但pH 10．0时，则不利丁．衍生的进行，而且，pH值越人，越有利．-／：DNFB的水解反应。冈此，综 合NaHC0：，的缓冲区，选择pH在8．5～9．O为宜。 2．2氨基酸的分离结果标准氨基酸的分离结果j^!．图l(略)。可以看出，15种氨基酸能够 完全分离。样品采用外·标法米测定，两个样品的氮基酸的组分的测定结果见袭l。 表1 生物发酵样品的氯基麓组成(mg／g) 氨坫酸 Asp I，