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流式细胞分选仪（BD Influx ） 工作指南 暨南大学生物医药研究院 周玉英 2012 年06 月 第一章 流式细胞仪管理使用守则 1. 优先权原则： 本流式细胞分析分选仪器由暨南大学“211”重点学科“生物技术与生物工程药物”学 科组所用并使用，故在同一时间段内： ●本校优先于外校使用； ●学科组优先于外单位使用； ●学科组内各单位使用优先权采用轮流制，相关单位优先权周可优先使用。 2. 专人使用原则： ●流式细胞分析仪（Calibur ）必须由已培训合格的的实验技术老师或学生严格按照 操作规程进行操作。 ●对于流式分选仪Influx ，只能由培训合格的课题组负责老师操作，严禁学生操作。 ●课题组负责老师或学生需定期接受培训，培训后合格后若两个月之内未使用仪 器，必须再次培训合格后才可使用流式仪。 3. 预约原则： ●请与操作老师沟通后至少提前一天预约，预约时先提交有导师签字的预约表，再 由管理人员统一在网上预约。 ●不能按预约时间使用流式时，至少提前一天取消预约，否则将正常收费。 ●不接受提前超过2 周以上的预约。 4. 做好使用登记： ●仪器使用完毕后，切记如实进行仪器使用记录登记，管理人员会核对是否与预约 记录的一致性。 5. 随时保持清洁： ●进入流式房请更换拖鞋，离开流式房时，请将拖鞋放回鞋柜内。 ●禁止随手乱放杂物（如一次性手套、塑胶手套，用完的样品等）。 ●走前请带走制造的垃圾（包括细胞垃圾、耗材垃圾和生理盐水瓶等）。 ●实验老师在课题组的优先权周实验老每周二、周五下午清洁流式房卫生，包括清 洁地面、桌面、倒掉除湿机水箱中的水。 1 6. 刻录数据： ●刻录数据只能用一次性的CD 盘或DVD 盘，严禁用自备U 盘或可擦写光盘进行 数据刻录。 7. 安全使用原则： ●必须严格按照培训时的流式使用规程操作仪器，严禁违规操作。 ●对有毒或有污染的样品需提前对操作老师说明，严禁随处乱放有毒、有污染的样 品。 ●仪器使用完毕后，离开房间时，锁好门窗，包括流式房门和725 房间的玻璃门。 8. 处罚措施： 请遵守上述规则，管理人员将对使用者进行监督和规范，对违规将进行登记并通 报，连续三次违规者，停用整个课题组使用权一周。 2 第二章 流式细胞分选仪简易手册 1. 流式细胞分选仪的参数介绍 1）5 根激光器，包括488nm 、405nm 、561nm、355nm、640nm 2 ）检测的PMT 包括： 530/40 [488]、580/30 [488]、610/20 [488]、692/40 [488]、750LP [488]、460/50[405]、 520/35 [405]、585/29[561]、615/24 [561]、460/50 [355] 、670/30 [355]、670/30[640]、 720/40 [640] 、750LP [640] 3 ）具有细胞分析的功能。 可同时检测14 个荧光参数，常用的荧光染料有：FITC/GFP 、PerCP 、PE 、PE-CY5、 PE-CY5.5、PE-CY7、Pacific Blue 、Pacific 、Orange、Qdot605、Hoechest Blue 、 Hoechst Red 、APC 、APC-CY5.5、APC-CY7 4 ）无菌细胞分选的功能，可进行2 路或4 路分选。 5 ）可将细胞无菌分选到流式管、96 孔板、24 孔板、1.5mlEP 管、玻片等装置上。 2. 准备工作 1）先将整个流式细胞房、分选收集室、传递仓进行紫外消毒30min 。 2 ）准备好足量的高压灭菌的超纯水、无水乙醇等试剂。 3 ）将实验服洗干净并高压灭菌，并准备好配套的鞋套、一次性口罩、一次性帽子 及无菌的乳胶手套等用具。 4 ）检查鞘液桶中PBS 缓冲液是否足够，若不足，将PBS 缓冲液加入鞘液桶直至 达到桶内标记线，盖紧桶盖，旋紧鞘液桶上的气阀。 5 ）检查废液桶中的废液是否清空，并加入2ml 次氯酸钠溶液，盖紧桶盖。 6 ）开空调，保证房间内的温度在22 度（暨大仪器空调保持 24h 全天开启状态， 如果长期不用，则关掉空调）。 7 ）了解样品的特征，选择将要用