细胞在微载体上迁移过程中整合蛋白a2亚基与a3亚基的表达.pdfVIP

第二届全国发酵工程学术讨论会论文粜1998 细胞在微载体上迁移过程中 整合蛋白a2亚基和Q3亚基的表达 顾铭欧阳藩戚艺华 (中国科学院生化工程国家重点实验室北京loooso) 温华杰 (丹麦AARHUS大学细胞生物学系) 摘要本文研究Vero细胞在徽载体上迁移过程中，整合蛋白a2亚 基和证3亚基的表达，以便进一步研究Vero细胞与细胞外基质的粘附。 从而了解Vero细胞在微载体上的迁移机制和生长过程。结果表明： Vero细胞表达整合蛋白鼠2亚基并随培养时间丽表达量增加．且主要 分布予细胞附着斑；Vero细胞在迁移过程中a3亚基表达增强． 关缝词整合蛋白，细胞迁移，微载体 细胞在微载体上表现出典型的兰维立体条件下的迁移运动， 与细胞在生物体内的迁移相似。所以，了解细胞在微载体上的迁 移机理对认识细施在体内的迁移有非常重要的意义。 整合蛋白(Integrin)是细胞膜上一类十分重要的受体分子。整 Cellular 合蛋白介导细胞与细胞外基质(Extra MaU-ix)相互作用， 从而调节细胞极性和运动lJ’“。 l 材料和方法 1．i细胞系和培养方法 Veto细胞来自卫生部北京生物制品研究所。2x105／ml的 Veto细胞接种到15ml含O．159Cytodex-I和10％d、牛血清的199 培养萋中培养。细膀传代方法同文献f3】。 1．2细胞裂解方法 X- 微载体上的细胞用冷PBS洗涤两次，在裂解液(1％Tfiton 50mM 100，0．25％BSA，lNacl，5mMEDTA，20ttg／ml leupepin, 20mlvi 掉微载体，200，000xg离心，40clh，收集沉淀，溶于常规 Laemmli电泳载样液中。 1．3 Westcm印迹法 将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶中转移到硝酸纤维素膜上。兔抗 弟二瑶仝目发群工程学术讨论会论文嶷1998 a3标记硝酸纤维索膜40c Integrin d夜，然后用羊抗兔HRP标记 60-70min，用ECL化学发光试刷盒捡测。对整合蛋自以皿基的 标记也依此法。 1．4间接免疫荧光标记 向双碟内的载玻片上接种Veto细胞并培养过夜，取出载玻 片并用37。CPBS冲净，加3．5％戊二醛固定3rain；用5％牛妞清 ]gOFITC，放37。C湿盒1h，冲净，控千。 2 结果 2．1 Veto细胞表达整合蛋白a3亚基 通过蛋白质印迹法可以检测到Veto细胞在微载体上正常培 养条件下表达整合蛋白o‘3亚基(图1)。 +一～曩日j二0 ●……，M、}) 图l 用蛋白质印迹法捡测到 图2间接免疫荧光标记表明a2亚 Veto细胞表达整台蛋白娃甄基 基主要集中在细胞的附著斑上 氆细胞裂解后SDS结果：b．通 Fluorescence Fig．2 microscopyshow 过ECL可见∞亚鏊表达：a为ECL阴thedistributionofintegrina2 性对照 is inadhesion of mainly plaques The of鹋subunitin Fig．I expression Vetocell Vero cell a．SDSofcel