鸡源性高迁移率族蛋白B1多克隆抗体的制备及应用.pdfVIP

284 ChinJCellMolImmuno1)2014，30(3 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2014)03—0284—05 鸡源性高迁移率族蛋白B1多克隆抗体的制备及应用 张 娜 ，钱 琨 ，， ，朱明月 ，高爱俊 ，邵红霞 一，金文杰 ，一，秦爱建 ’， (扬州大学：江苏省动物预防医学重点实验室；教育部禽类预防医学重点实验室；江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协 同创新中心，江苏 扬州225009) [摘要] 目的 制备针对鸡的高迁移率族蛋白B1(chHMGB1)特异性抗原亲和层析多克隆抗体，并进行初步应用。方法 反 转录PCR扩增chHMGB1的全长编码基因，通过序列比对分析筛选一段特异性的多肽序列，偶联载体后作为抗原免疫新西兰 兔，采集血清，通过蛋白A柱及多肽偶联的Seprose4B柱得到亲和层析纯化的多克隆抗体；并利用Westernblot法、间接免疫荧 光染色、免疫组化方法进行鉴定。结果 成功制备了抗chHMGB1特异性的多克隆抗体。各项实验结果表明该抗体能特异性的 识别重组蛋白以及天然的chHMGB