超声微泡破裂法促进骨形态发生蛋白-2在小鼠骨骼肌表达地研究.docVIP

超声微泡破裂法促进骨形态发生蛋白-2在小鼠骨骼肌表达的研究 超声微泡破裂法促进骨形态发生蛋白-2在小鼠骨骼肌表达的研究 作者：孙钦峰 杜芳 徐岩 杨丕山 作者单位：1.山东大学口腔医院 牙周科，山东 济南 250012；2.徐州医学院 口腔系，江苏 徐州 221004 【摘要】 目的 探讨超声微泡破裂法对基因重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）质粒pIRES-rhBMP2-EGFP在小鼠骨骼肌的转染、表达的促进作用。方法 24只BALB/c小鼠随机分为4组，每组6只。A组和B组选择右侧胫前肌为注射点，其中A组注射质粒，B组注射质粒与微泡造影剂混合物后用超声辐照，质粒注射量为30 Μg；C组和D组选择右侧股四头肌为注射点，其中C组注射质粒，D组注射质粒和微泡造影剂混合物后用超声辐照，质粒注射量为100 Μg。7 d后处死A组和B组小鼠，取胫前肌在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况；14 d后处死C组和D组小鼠，取股四头肌行免疫组化检测rhBMP-2表达情况。结果 7 d后B组阳性肌纤维百分率高于A组（P0.05）；14 d后，C组和D组都可检测到rhBMP-2的表达，但D组rhBMP-2表达量比C组多。结论 超声介导微泡破裂法能增加外源性rhBMP-2基因在小鼠体内骨骼肌转染率和表达水平，有望为牙周病的基因治疗提供一种新型方法。 【关键词】 超声 微泡 基因治疗 人骨形态发生蛋白-2 　　Ultrasound-mediated microbubble destruction enhances bone morphogenetic protein-2 gene expression in mouse skeletal muscles SUN Qin-feng1, DU Fang2, XU Yan1, YANG Pi-shan1. （1. Dept. of Periodontology, School of Stomatology, Shandong University, Jinan 250012, China；2. Dept. of Stomatology, Xuzhou Medical College, Xuzhou 221004, China） 　　[Abstract] Objective To explore whether ultrasound-mediated microbubble destruction can enhance the expression efficiency of plasmid pIRES-rhBMP2-EGFP for bone morphogenetic protein-2（BMP-2） in mice skeletal muscle.Methods Twenty four male BALB/c mice were divided into four groups. The naked plasmid was injected into the pretibial muscle or the quadriceps muscle（group A and group C） without ultrasound-mediated microbubble destruction method. Micobubbles with plasmid were injected into the pretibial muscle or the quadriceps muscle（group B andgroup D） with destructing microbubbles by ultrasound immediately. Twelve mice（group A and group B, 30 Μg plasmid injected） were killed after 7 days and the tissue samples of the pretibial muscle were obtained to observe theexpression of enhanced green fluorescence protein（EGFP） by inverted fluorescence microscope, gene transfection ef-ficiencies were quantified by counting EGFP positive fibers on mice skeletal muscle. After 14 days, the other twelve mice（group C a