rhTGF-β1及转染TGF-β1基因对兔角膜内皮细胞增殖的影响.pdfVIP

维普资讯 生垦痘堡生理 查 eseJournalofPathophysiology 2008，24(5)：915—919 · 9l5 · 【文章编号] 1000—4718(2008)05—0915—05 rhTGF一 及转染 TGF一 基因对 兔角膜 内皮细胞增殖的影响 马慧香 ， 徐锦堂 ， 江振友 ， 张穗梅 ， 赵松滨 ， 陈建苏 (暨南大学医学院 眼科研究室，微生物学与免疫学教研室，’病理生理教研室，广东广州510632) [摘 要] 目的：探讨不同浓度的重组人转化生长因子一B，(rhTGF—B，)及TGF—B，基因转染对体外培养 兔角膜内皮细胞增殖的影响。方法：用MTT法检测不同浓度 rhTGF—B，作用下角膜内皮细胞的增殖。用脂质体 介导转染方法，将TGF—B，基因转移入培养的兔角膜内皮细胞，HE染色法观察细胞组织形态学变化；ELISA法检 测转染细胞培养上清中TGF—B，表达量 ；流式细胞仪检测细胞生长周期变化；DNA电泳法检测转染细胞凋亡情 况。结果：M1，I检测示 5—20 g／LrhTGF—B，抑制角膜 内皮细胞增殖；0．5—1 s／L组对增殖无影响；0．05～0．1 L组促进细胞增殖。TGF—B．基因转染细胞形态无明显异常，细胞培养上清中TGF—B．的浓度约为 (98±3) ns／L。流式细胞仪检测示，基因转染组S期和G ／M期细胞 比例减少、PI值降低，但加入EGF后细胞生长基本正 常。DNA电泳检测示基因转染组未见凋亡带。结论：rhTGF—B，对角膜内皮细胞增殖的影响具有剂量依赖性； TGF—B，基因转染影响角膜内皮细胞增殖、但不诱发凋亡 ，其抑制作用可被外源性EGF拮抗。 [关键词] 转化生长因子 B；基因转染；角膜内皮细胞；细胞增殖 [中图分类号] R363 [文献标识码] A EffectsofrhTGF一 andTGF一 genetransfectionontheproliferation ofculturedrabbitcornealendothelialcellsin vitro MAHui—xiang，XU Jin—tang ，JIANGZhen—you ，ZHANGSui—mel一，ZHAOSong — bin ．CHEN Jian—su (LaboratoryofOphthalmology，DepartmentofMicrobiologyandImmunoolyg，DepartmentofPathophysoiolyg。Medical College，JinanUniversity，Guangzhou510632，China．E—mail：txjt@jnu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectsofrhTGF—BlandTGF—Blgenetransfectionontheproliferation ofculturedrabbitcornealendothelial ceHsinvitro．METHODS：CellgrowthinducedbyvariousconcentrationsofrhTGF— B1wasdeterminedbyM1，Iproliferationassay．Underhteinductionofliposomes，recombinantpSecTag2一TGF—BlMP vectorsweretransferredintothecorneal endothelial cells．Morphological changesof rtansfectedcellswereobservedbyHE staining．TheexpressionlevelsofTGF—BlwereassessedbyELISA．Cellcyclenaalysiswasassessedbyflowcytometry．