RIP2对大肠杆菌的抗菌作用研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(5)：951—955 · 951 · [文章编号] 1000—4718(2011)05—0951—05 RIP2对大肠杆菌的抗菌作用研究 席 琼， 胡巢凤 ， 张 芸， 陆大祥， 蒋 宇 (暨南大学医学院病理生理学教研室，国家中医药管理局三级科研实验室，广东 广州510632) [摘 要] 目的：探讨受体相互作用蛋白2(RIP2)对人肠细胞清除大肠杆菌的作用。方法 ：使用阳离子聚合 物JetPei介导人RIP2基因(pEGFP—C2一PIP2)转染人结肠癌SW480细胞株，以转染空质粒及未转染的 SW480 细胞株作为对照，应用 RT—PCR检测外源性 RIP2mRNA水平的变化、Westernblotting法检测细胞RIP2蛋白的表 达；并利用大肠杆菌 ATCC25922感染转染和未转染的SW480细胞24h，用平板培养菌落计数活菌数。应用p38 MAPK通路抑制剂SB203580作用于3组细胞 ，计数活菌数。结果：与对照组相比，转染RIP2组其 mRNA和蛋白表 达水平均有明显升高(P0．01，P0．05)，表明RIP2表达质粒成功转染SW480细胞。转染RIP2细胞能清除胞内 大肠杆菌；而阻断p38MAPK信号通路后 ，RIP2清除胞内大肠杆菌的作用被阻断。结论：RIP2转染细胞可有效清 除胞内大肠杆菌，这种胞内细菌的清除作用可能与p38MAPK信号通路有关。这些结果提示RIP2在细菌感染性疾 病治疗中具有广阔的临床应用前景。 [关键词] 受体相互作用蛋白2；基因转染 ；抗菌作用 [中图分类号] R392．11 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．05．022 ExpressionofRIP2enhancesclearanceofintracellularEscherichiacoliin SW480cells xIQiong，HUChao—feng，ZHANGYun，LUDa—xiang，JIANGYu (DepartmentofPathophysiology，KeyLaboratoryofStateAdministrationofTraditoinalChineseMedicine，SchoolofMedi— cine，．1inanUniversity，Guangzhou510632，China．E—mail：thcJ~ u．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheclearanceeffectandmechanismofhighexpressionofreceptor—interacting protein2(RIP2)againstEscherichiacoli(Ecoli)inintestinalcells．METHODS：RIP2gene(pEGFP—C2一PIP2)was transfectedintocelllineSW480bythemethodofJetPei ．We．sternblottingandRT—PCRnaalysiswerethenusedtode． tectRI12proteinandmRNA expression，respectively．Thetransfectedandnon—transfectedcellswereincubatedwithE． coliat37oC．At24hafterinitialincubation，theviableintracellularbacteriaWerequantifiedbyplatingappropriatedilu- tiononLBagarplates．Thetransfectedandnon—transfectedcellsweretreatedwithSB203580，aninhibitorofp38MAPK pathway，andthechna gesofintracellularbacteriawerealsoquantified．RESULTS：Compa