SELDI—TOF—MS技术检测心绞痛患者血浆蛋白指纹图谱的研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(2)：389—391 · 389 · [文章编号] 1000—4718(2009)02—0389一O3 SELDI—ToF—MS技术检测心绞痛 患者血浆蛋 白指纹图谱的研究木 何文娟 ， 胡 豫 ， 张小平。， 余捷凯 ， 洪 梅 ， 郭 涛 ， 宋善俊 (华中科技大学同济医学院协和医院血液病研究所 ，湖北省生物靶向治疗重点实验室， 湖北 武汉 430022；浙江大学附属第二医院肿瘤研究所，浙江杭州 310009) 【摘 要] 目的：采用表面增强激光解析／电离飞行时间质谱 (SELDI—TOF—MS)技术检测心绞痛患者血浆 蛋白质指纹图谱，从中筛选出特异的分子标志物。方法：应用SELDI—TOF—MS技术及金属离子螯合(IMAC一3) 蛋白质芯片对20例心绞痛患者和29例正常对照者血浆样本进行检测，借助生物信息学工具 (非线性的支持向量 机，SVM)提出心绞痛的诊断模型 ，并运用留一交叉验证法来评估该模型的判别效能。结果：用 SELDI—TOF—MS 技术筛选出由3个有显著差异的蛋白质峰 [质荷 比(m／z)分别为2667．3、5914．0和6890．5]组合构建的诊断模 型，可将20例心绞痛患者和29例正常人全部正确分组 ，诊断特异性和灵敏度均为 100％。结论：SELDI—TOF—MS 技术在心绞痛的诊断中具有较高灵敏度和特异性，发现的蛋白质峰可能在心绞痛的发病中起一定作用，血浆 中分子 标志物的发现有助于心绞痛的早期诊断。 [关键词] 心绞痛；表面增强激光解吸／电离飞行时间质谱；蛋白质组 [KEYWORDS] Anginapectofis；Surface—enhancedlaserdesorption／ionizationtime—of—flight；Proteome [中图分类号] R541．4 [文献标识码] A 表面增强激光解析／电离飞行时间质谱 (surface—en— 3．2％枸橼酸三钠抗凝管 (抗凝剂：全血为 1：9)中并混匀，采集 hancedlaserdesorptiort／ionization time——of——flightmassspec·· 后30min内将标本在4 下以3500r／win离心6win，将上层 trometry，SELDI—TOF—MS)技术是一种新兴的蛋 白组学研 血浆分装于已消毒的EP管中，保存于一80℃冰箱，待测。 究手段，它具有检测时间短、灵敏度高等特点…，分析蛋 白质 2 方法 的改变不仅可直接获得功能相关的标志物，而且还适用于标 2。1 标本准备 血浆标本在冰上解冻30rain后 ，以10000 准化和临床应用 ，现已应用于对疾病生物标志物的分析 r／min转速于4℃离心2win，取5 L样本分别加入96孔细 中 -53，然而，这一技术很少用于对心血管疾病特异性蛋白质 胞培养板上，用 10 L尿素缓冲液(9mol／L尿素，2％chaps， 的检测。本研究采用 SELDI仪及金属离子螯合(metal—ion 1％DTF)稀释后，4oC600r／min摇床 30min；快速加入 affinitychromatography，IMAC一3)蛋白质芯片检测心绞痛患 185 L醋酸钠 (pH4．0)，4oC600r／win摇床2win。 者和正常对照者血浆蛋 白质指纹图谱，筛选出蛋白标志物并 2．2 蛋白芯片的预处理 将 100mmol／L硫酸铜 50 加 到8孔IMAC一3芯片池内，室温600r／win摇床 10min，甩干 建立诊断模型。 后加200IxL去离子水，室温600r／min摇床 1min，甩干后加 材 料 和 方 法 100mmol／L醋酸钠 (pH4．0)200p,L，室温600r／min摇床 5min，甩干后加200IxL去离子水室温6OOr／rain摇床 lrain， 1 材