Shh在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(1)：159．164 · 159 · [文章编号] 1000．4718(2014)01．0159．06 Shh在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞 成骨分化过程 中的作用 靳思思 ， 胡洁芬 ， 吴 文 (。南方医科大学，广东 广州 510515；广东省人民医院，广东省医学科学院东病区内分泌科，广东 广州510080) [摘 要] 目的：研究 SonicHedgehog(Shh)在雷奈酸锶 (strontiumranelate，Sr)促进大鼠骨髓间充质干细胞 (BMSCs)向成骨细胞分化中的作用。方法：采用全骨髓贴壁培养法分离、纯化、培养大鼠BMSCs，取第3—5代BM． SCs加入成骨诱导液诱导成骨分化 ，再加入不同浓度 sr及 Shh拮抗剂 cyclopamine(Cy)，分别观察它们对 BMSCs向 成骨细胞分化的影响。酶标法检测成骨细胞分化早期标志物碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase，ALP)的活性 ；茜素 红染色检测细胞钙化水平；Westernblotting法检测Shh和Runx2蛋白的表达情况。结果：Sr(3mmol／L)可以使细胞 ALP活性增高，钙结节形成增加。Sr(0．1—5mmol／L)作用 BMSCs7d，可明显促进Shh和Runx2蛋白的表达 ，且 Shh蛋 白在 1mmol／LSr作用时表达最多，而Runx2在3mmol／LSr作用时表达最多。1mmol／LSr作用BMSCs不同 时间(1、3、5、7d)，呈时间依赖性地上调 Shh和Runx2蛋白的表达。cy(10I~mol／L)不仅拮抗sr对Shh和Runx2表 达的上调作用，还抑制sr对ALP和钙结节形成的促进作用。结论：Sr可通过上调Shh蛋白及成骨特异性转录因子 Runx2的表达促进BMSCs向成骨细胞分化。 [关键词] 雷奈酸锶 ；骨髓间充质干细胞 ；成骨细胞；Shh蛋白；Runx2蛋白 [中图分类号] R5 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2014．01．027 Strontium renelatepromotesosteogenesisviaregulation ofSonichedge- hogsignalingmoleculesinratbonemarrow mesenchymalstem cells JIN Si．si，-．HUJie．fen，一，WUWen (SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China；DepartmentofEndocrinology，EastWard，GuangdongGeneral Hospital，GuangdongAcademyofMedcialSciences，Guangzhou510080，hCina．E—mail：wuwen1946@163．corn) [ABSTRACT] AIM ：TostudytheroleofSonicHedgehog(Shh)instrontiumranelate(Sr)·inducedosteogenic differentiationofratbonemarrowmesenchymalstemceils(BMSCs)．METHODS：BMSCswasisolatedfrom4-week-old ratsbyadherentculture．Thecellsinthe3rd～5thgenerationswereinducedtodifferentiateintoobteoblasts，andthenwere treatedwithdifferentconcentrationsofSrandcyclopamine(Cy)．Theactivityofalkalinephosphatase(ALP)wasmca- suredbycolorimetry．Mineralizednoduleswereobse