雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响.pdfVIP

· 656 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(4)：656—660 [文章编号] 1000—4718(2009)04-0656—05 雌激素受体 2对前列腺癌细胞系 PC一3M 增殖的影响：I： 李 峰， 李 帅， 郭丽荣， 邵月婷， 汲 坤， 李 扬 ， 赵雪俭 (吉林大学 白求恩医学院病理生理教研室，前列腺疾病防治研究中心，吉林 长春 130021) [摘 要] 目的：构建带有人雌激素受体2(ESR2)全长cDNA的重组质粒pcDNA3．1一hERB，转染人前列腺 癌PC一3M细胞株，观察ESR2对细胞增殖能力的影响。方法：RT—PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长 cDNA，利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3．1连接 ，构建重组质粒pcDNA3．1一hERt3；瞬时转染前列腺癌 PC一3M细胞株，应用细胞计数、MTr法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变；半定量 RT—PCR法及 Western blotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和 P21CiplmRNA及蛋白表达。结果：DNA测序结果显示扩增的ESR2序 列与GenBank(NM_001437)所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3．1一hERI~瞬时转染人PC一3M细胞48h 后，与质粒对照组相比：RT—PCR法及 Westernblotting法显示，ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显 增加；细胞计数及 MTT结果发现，细胞数 目减少，细胞增殖活性下降(P0．01)；流式细胞实验显示，G。／G 期细胞 比例增加 (P0．05)，S期及 G2／M期细胞比例减少 (P0．05)；RT—PCR及 Westernblotting结果还发现 cyclinD1 的表达减弱，而P21Cipl的表达增强。结论：成功构建pcDNA3．1一hERI3重组质粒；带有 ESR2全长基因的重组质粒 转染PC一3M细胞后，细胞的增殖活性受到抑制 ；RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和 P21Cipl的表达 抑制细胞的增殖。 [关键词] 受体 ，雌激素；PC一3M细胞；真核表达 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Effectofestrogen receptor2 on thecellproliferation in prostatecancer celllinePC —．3M LIFeng，LIShuai，GUO Li—rong，SHAO Yue—ting，JIKun，LIYang，ZHAOXue— pan (DepartmentofPathophysiology，NormanBethuneCollegeofMedicine，ProstateDiseasesPreventionandTreatmentRe— searchCenter，JilinUniversity，Changchun130021，China．E—mail：lyang@flu．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：ToconstructtherecombinationplasmidpcDNA3．1一hERI3withthehumanes~ogenreceptor 2 (ESR2)fulllengthcDNAandtransfectitintohormone—independentprostatecancerPC一3M cellline．andtostudythe effectsofESR2onproliferationintrnasfectedcells．nETHODS：ThecompletecDNA ofES112wasobtainedfrom human ovarytissuebyRT—PCRtechniquenadclonedintoeukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1byusinggenerecombination techniuqetoconsturctthepcDNA3．1一hERI3recombinat