融合蛋白CXCL10-loop3-EGF的可溶性表达及其抗肿瘤效应研究.pdfVIP

· 2376· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(12)：2376—2380 [文章编号] 1000—4718(2009)12—2376—05 融合蛋 白CXCL10一loop3一EGF的可溶性 表达及其抗肿瘤效应研究 沈 波 ，傅 鹰 ， 孟哲峰 ，徐 巍 ， 何小帆 ，朱 敏 (浙江省台州医院检验科，浙江 台州317000；复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室，上海 200032) [摘 要] 目的：构建重组趋化因子 CXCL10及表皮生长因子受体干扰序列融合蛋白(CXCL10一loop3一 EGF)，验证其靶向性抗肿瘤效应及抑制血管形成活性。方法：运用RT—PCR从经 IFN一-y刺激活化的PBMC中扩 增人CXCLIO基因，运用重叠延伸PCR法扩增CXCLIO—loop3一EGF融合基因，并将其与载体pTG19一T连接、转 化大肠杆菌DH5c~、筛选阳性克隆，CXCLIO—loop3一EGF融合基因与载体pET32a(+)连接 、转化大肠杆菌 Origami B(DE3)，诱导可溶性表达重组his—CXCL10一loop3一EGF融合蛋 白，并经镍柱亲和层析 、酶切、超滤及透析等方法 获得纯化的重组 CXCL10一loop3一EGF融合蛋白。通过Transwell细胞趋化实验及HUVEC血管形成抑制实验验 证此融合蛋白的抗肿瘤效应。结果：SDS—PAGE和Westernblotting证实CXCL10一loop3一EGF融合蛋 白构建成 功，纯化后的融合蛋白具有显著的趋化活化 PBMC活性及抑制 HUVEC血管形成活性。结论 ：成功构建融合蛋 白 CXCL10一loop3一EGF，该蛋白具有较好的靶向性抗肿瘤活性。 [关键词] CXCL10一loop3一EGF融合蛋白；可溶性表达；抗肿瘤效应 [中图分类号] R73 [文献标识码] A Solubleexpression ofa CXCL10——loop3—-EGF fusion protein and its anti——tumoractivity SHEN Bo ，FU Ying ，MENG Zhe—feng ，XU Wei，HEXiao—fan ，ZHU Min (D‘epartmentofClinicalLaboratory，TahouHospital，ZhejiangTahou317000，China；KeyLaboratoryofMedical MolecularVirology，MinistryofEducation，FudanUniversity，Shanghai200032，China．E—mail：shenb@tzhospita1．com) [ABSTRACT] AIM：ToevaluatetheimplicationofCXCL10一loop3一EGFfusionproteinfortheactivitiesoftar— getingtumorandanti—angiopoiesis．METHODS：RT—PCRwaspreformedtoamplifyCXCL10codingsequencefrom PB— MC activatedbyIFN一^y．CXCL10一loop3一EGFfusiongene，whichwasconductedbyOver—LapExtentionPCR，was hingedupwithplasmidpTG19一T，transfectedtoE．coliDH5ctandprocessedpositivecolonyselection．Afterligatedwith plasmidpET32a(+)，recombinantCXCL10一loop3一EGFfusiongenewasthentransfectedtoE．coliOrigamiB(DE3) andinducedtoexpressitscodingfusionproteinhis—CXCL10一loop3一EGF．TherecombinantfusionproteinCXCL10一 loop3 一EGF waspurifiedbyHis