免疫组化检查在病理诊断中的应用和其意义.docVIP

免疫组化检查在病理诊断中的应用及其意义 免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。免疫组化常用的染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。 一、病理外检中常用抗体标记 ????上皮类标记 ????AE1/AE3最常用，胞浆阳性着色，细丝状，与低、中分子量角蛋白反应，肝细胞为阴性，而胆管细胞阳性，用于确定肿瘤为上皮源性；CAM5.2胞浆阳性着色，细丝状，包含CK8 和CK18，主要染色神经内分泌细胞和腺上皮，正常鳞状上皮阴性，用于染小细胞癌、胸腺瘤和梭形细胞癌、肝细胞癌：AE1/AE3（-） CAM5.2 （+），用于乳腺外的Paget’s病；CK34BE胞浆阳性着色，鳞状上皮和鳞状细胞癌阳性，用于染前列腺的基底层细胞，鉴别浸润癌，染涎腺肿瘤的肌上皮，用于染Mallory小体；EMA细胞膜/细胞浆阳性着色，上皮标记的替代品，浆细胞阳性，很好的内对照，用于染滑膜肉瘤 、大细胞分化不良性淋巴瘤 、LH 富于淋巴细胞的结节状何杰金、脑膜瘤EMA（+）AE1/AE3（–）、浆细胞瘤；CK7和CK20胞浆阳性着色，两者联合应用可鉴别很多种癌的原发部位，CK7 常常在胃肠道的癌为阴性 ，CK20 只有胃肠道癌和Merkel 细胞癌阳性。 ????间皮细胞标记 ????Calretinin细胞核和细胞浆阳性着色，核阳性着色为必需，间皮强阳性，Sertoli和肥大细胞阳性，用于鉴别间皮瘤（+）和腺癌（-），常加CEA，鉴别梭形细胞间皮肉瘤（+）和其他的浆膜腔肉瘤（-），鉴别胸、腹水中的癌细胞和间皮细胞，确定为间皮细胞，如大网膜内陷入的一团细胞或腺瘤样瘤，神经元分化标记，如中枢神经细胞瘤，帮助确诊心脏粘液瘤，几乎全为（+）。 ????白细胞标记 ????非何杰金淋巴瘤大致分类 ????CD20（L26），CD3怀疑T 细胞淋巴瘤者加UCHL-1（CD45RO），怀疑浆细胞瘤者LCA（CD45RB）,CD79a, CD138，小B 细胞淋巴瘤者，CD79a, CD43（MT1）；LCA（CD45RB）几乎所有的白细胞（+），有些淋巴母细胞淋巴瘤、大细胞分化不良性淋巴瘤、外周T 细胞淋巴瘤（- ），经典Hodgkin 的R-S 细胞（-），以往浆细胞瘤（-），现（+），HE 下明确的淋巴瘤不必要染LCA。 ????B细胞相关标记 ????CD20（L26）胞膜阳性着色，浆阳者不可判为阳性，各阶段B 细胞阳性，除了原始的前B 和非常成熟的浆母、浆细胞 ，用于染B 细胞淋巴瘤，除了小细胞、淋巴母细胞（不恒定）和浆细胞瘤常（-） ，梭形细胞胸腺瘤（+）；CD79a胞浆阳性着色，有/无核周聚集，全B 细胞标记，包括浆母和浆细胞，标记滤泡中心比mantle和滤泡间B要弱，比CD20贵得多，用于鉴别淋巴母细胞淋巴瘤/白血病，弥漫性小B 细胞淋巴瘤/白血病，浆细胞瘤常CD20(–)而CD79a 50% (+)。 ????T细胞相关标记 CD3（polyclonal）胞浆阳性着色，核周凝聚，有时高尔基体也阳性，极好的T 细胞标记，与CD43 不同，髓系细胞和组织细胞不着色，极好的T 细胞和NK 淋巴瘤标记，虽然有些大细胞型T 细胞淋巴瘤阴性；CD43 （MT1）只有膜阳性才能判为阳性，T 细胞、T 细胞淋巴瘤、真性组织细胞肿瘤、粒细胞肉瘤阳性，一部分浆细胞瘤阳性，小B 细胞淋巴瘤阳性，这一特点可辅助表明增生的小淋巴细胞为肿瘤性！EBV 感染的B 细胞阳性