水溶性酵母葡聚糖的制备和应用研究进展.docVIP

水溶性酵母葡聚糖的制备及应用研究进展 摘 要:啤酒酵母葡聚糖是一类免疫多糖,参与生物细胞的多种生命调节,可激活免疫细胞,调节机体免疫力,具抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤等功能,且毒副作用低,被称为生物效应应答剂。近年来,越来越多的学者开始研究和开发酵母葡聚糖。论文对酵母葡聚糖的结构、提取方法、结构修饰和应用进行了简述,对提取方法和结构修饰中的各种方法进行了综合比较和分析;并重点介绍了提高酵母葡聚糖的水溶性的方法及相对应的鉴定方法,这将为酵母葡聚糖的开发利用奠定一定的理论基础。除此之外,论文还对酵母葡聚糖的进一步开发利用进行了展望。 关键字:酵母葡聚糖;提取方法;分子修饰;鉴定 啤酒酵母葡聚糖是从啤酒酵母细胞壁中提取的 一种葡萄糖聚合物,因为它具有增强免疫功能的能 力,被誉为是生物效应应答剂[1]。研究表明,啤酒酵 母葡聚糖对哺乳动物的特异性和非特异性免疫功能 均有刺激作用[2],可以促进巨噬细胞对多种病原,如 细菌、病毒、真菌和寄生虫等的免疫反应,进而提高 机体免疫系统对病原体侵入的抵抗力。但由于酵母 葡聚糖难溶于水和纯度低等原因,限制了它作为药 物在生产中的应用,因此开发和利用水溶性酵母葡 聚糖,具有广阔的应用前景和市场开发潜力。 1 酵母细胞壁的结构 啤酒酵母细胞壁占细胞干重的20%~30%,酵 母细胞壁由29%~64%的B葡聚糖、31%的甘露聚 糖、13%的蛋白质、9%的脂类和1%~2%几丁质组 成[3]。葡聚糖是酵母细细胞壁最重要的结构成分之 一,其主要包括碱溶性和碱不溶性两种,其中以碱不 溶性B-1,3-葡聚糖占绝大多数。酵母碱不溶性B1, 3-葡聚糖是一种活性多糖,制备酵母B-葡聚糖即提 取碱不溶性B-1,3-葡聚糖。目前,其结构研究得较 为清楚,大部分是由D-葡萄糖通过B-1,3-键的方式 相结合的聚合物,也有小部分以高度分支的B-1,6- 键结合的葡聚糖[4]。B-1,3-葡聚糖生物活性主要由 连接方式、分子大小和构象所决定,高分子的B-1,3- 葡聚糖具有独特的分子结构,它通常以三股螺旋的 构象存在,这种三股螺旋结构对其免疫调节活性起 至关重要的作用。酵母细胞壁中碱不溶性多糖 80%以上是B-1,3-D-葡聚糖,其分子质量大约为 240 ku,具有很强的免疫活性[5]。 2 酵母葡聚糖的提取 目前国内外提取酵母B-1,3-D-葡聚糖的方法主 要有酸法、碱法和酸碱综合法等。 2.1 酸法提取 酸法提取是最早采用的酵母B-1,3-葡聚糖提取 方法。一般用不同浓度的醋酸在50e~90e温度 条件下处理3 h~6 h,离心后沉淀脱水,干燥即得成 品。早期国内外学者对此法进行了较多的研究,黄 丹等[6]、黄刚良[7]对此提取方法进行了研究,结果表 明,此法虽然产品得率高,但纯度低,产品中蛋白质 和甘露聚糖含量高,需要进一步纯化。由于这些原 因使其应用受到一定程度的限制,近年来国外对此 提取方法的报道很少。但若对成品B-1,3-葡聚糖的 纯度要求不高,如作为饲料添加剂使用,其不失为一 种经济有效的提取方法[8]。 2.2 碱法提取 李卫旗等[9]用碱法提取酵母B-1,3-葡聚糖。用 不同浓度的NaOH高温处理3 h~6 h,离心后沉淀 脱水,干燥即得成品。廖鲜艳等[10]对此法进行了改 进,采用二步碱处理方法进行提取,降低了碱处理时 NaOH溶液浓度,并提高了产品的纯度。万婕等[11] 进一步改进提取工艺,在碱处理后离心,沉淀用蒸馏水悬浮,再用盐酸调节pH至4.5,离心、水洗、脱水、 干燥。由于采用了酸性溶液洗涤,除去了部分酸溶 性的糖元及B-1,6-D-葡聚糖,因而纯度又有所提高。 碱法提取所得的产品得率稍低,纯度较高,但产品中 还含有少量酸溶性糖元及B-1,6-D-葡聚糖。此法较 适于对提取物纯度要求较高的产品,如食品和医药 用品。 2.3 酶-碱法 Freimund S等[12]采用碱性Savinase蛋白酶来 处理酵母细胞壁制备酵母葡聚糖,得到含量85%以 上的葡聚糖样品。马森等[13]利用木瓜蛋白酶-碱法, 得到了纯度为90.50%,得率为11%的酵母葡聚糖。 酶处理酵母细胞壁后能去除大量蛋白,从而降低后 续碱的浓度和使用量,使得到的酵母葡聚糖产品分 子结构更加完整。由于葡聚糖的分子结构与其生物 活性密切相关,因此,酶法更适合于大规模酵母葡聚 糖的提取纯化。 2.4 其他方法 除上述传统的方法外,一些研究学者还采用其 他方法来制备纯度较高的酵母葡聚糖产品。日本 Ohno N等[14]采用次氯酸钠溶液在室温条件下处理 酵母细胞壁得到的高纯度酵母葡聚糖产品,收率为 20%。此方法虽能得到纯度较高的酵母葡聚糖,但 是强氧化剂对葡聚糖分子结构的影响还有待深入研 究,需考察对其生理活性的影响。 以上方法获得的B-1