提高平末端连接效率的研究.pdfVIP

新疆农业科学 　2002 ,39 (5) :300～301 Xinjiang Agricultural Sciences 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 提高平末端连接效率的研究 张 伟 ,艾秀莲 ,王 玮 ,王志方 ,崔春生 ,李晨华 ,谢玉清 (新疆农科院微生物所 ,新疆乌鲁木齐 830000) 摘 　要 :在平末端连接反应中 ,为了提高连接效率 ,研究载体与片段的分子量比、载体与片段的摩尔比、连接反应 体积 、连接反应的温度 、连接反应时间长短等条件对连接效率的影响 ,发现这些因素都会直接影响连接效率 。因 此在做不同的平末端连接反应时 ,应该把上述因素协同起来考虑 。此外 ,反应时间长短也应根据不同情况区别 对待 。 　　关键词 :平末端连接 ;连接效率 ;普适性 ( ) 中图分类号 :Q523 　　　文献标识码 : 　　　文章编号 :1001 - 4330 2002 05 - 0300 - 02 The Study to Improve the Efficiency of Ligation of Blunt - ended DNA ZHANG Wei ,AI Xiu - lian ,WANG Wei ,WANG ZHi - fang ,CUI CHun - sheng ,LI CHeng - hua ,XIE Yu - qing ( ) Institute of Microorganism , Xinjiang Academy of Agricultural Sciences , Urumqi 830000 Abstract : It is important to improve the efficiency of ligation reaction , especially for joining of blunt - ended DNA which is univer sal applicated , however , with lower efficiency. In our study , We draw a conclusion that the mol - ratio of vector and insert、the volume of ligation reaction 、the temperature and time of ligation reaction etc. All can influence the efficiency of ligation , so we should think of these factors together. Key words : Ligation of blunt - ended DNA ; Efficiency of ligation 在分子生物学的研究中 ,DNA 末端的连接是一极为常用的基本操作 ,可分为粘末端和平末端连接 , 粘末端连接效率相对较高 ,平末端的连接效率一般非常低 ,但平末端连接具有普适性 ,被广泛地用于将 外源 DNA 片段的相互连接当中。通常为了提高平末端的连接效率 ,实验者可以采用反应混合物具有低 ( ) ( ) 浓度 0. 5 mmol/ l 的ATP 、不存在亚精胺一类的多胺 、极高浓度的连接酶 50 Weiss 单位/ ml 、高浓度的平 末端 、加入凝聚剂等方法 ,但对于极其稀有的基因来说 ,这些方法都不适用 。本实验室在长期的分子生 物学研究中 ,多次遇到平末端连接效率低下的情况 ,经过长期的实践与摸索 ,研究出了有效