04.第四章 核酸结构的功能.ppt

(一) mRNA结构特点 1.大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2也是甲基化，形成帽子结构：m7GpppN。 2.大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾。 3.帽子结构和多聚A尾的功能 mRNA核内向胞质的转位；mRNA的稳定性维系；翻译起始的调控 。 一、mRNA的结构与功能 了解即可 7－甲基鸟苷三磷酸 帽子结构 多聚A尾结构 O O CH2 O OH + N HN N O H2N N CH3 O OH H2C O- O P O O P O- O P 鸟嘌呤 O O- O P O O AAA-OH 3/ AUG GUG······GCGAGGTGTATTGA······ UAA AAAA ······An m7Gpppp 5/帽子结构 5/非编码区 编码区 3/非编码区 3/多聚A尾 了解即可 (二) mRNA的功能 1.构成遗传密码，传递DNA所携带的遗传信息。 2.用连续三个核苷酸作为密码子以决定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。 中心法则 五、核酶 (一)具有催化功能的核酸称为核酶。 底物部分 (二) 核酶的锤头状结构 通常为60个核苷酸组成，包括有催化部分和底物部分组成锤头结构。 (三)核酶研究的意义 核酶的发现，对中心法则作了重要补充；是对传统酶学的挑战；利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 了解即可 核酸是含磷酸和碱基的两性电解质，通常表现为较强的酸性。可用电泳和离子交换分离纯化核酸。 在碱性条件下，RNA不稳定，可在室温下水解。利用这个性质可以测定RNA的碱基组成，也可清除DNA溶液中混杂的RNA。 核酸是线性的大分子，其在溶液中的粘度很高。RNA分子比DNA短，在溶液中的粘度低于DNA。 第四节 核酸的理化性质 (The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid) 一、核酸的一般性质 二、紫外吸收 (一) 由于嘌呤和嘧啶中含有共轭双键，核酸在260nm处有最大吸收峰。(蛋白质在多少nm处有最大峰？) 碱基的紫外光谱 240 250 260 270 280 波长(nm) 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 分子消光系数 AMP GMP UMP CMP dTMP 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于： 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 (二) OD260的应用 了解即可 三、DNA的变性与复性 (一)变性 (denaturation) 1.定义 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。本质是什么？ 3.变性后其他理化性质变化 ① OD260增高 ② 浮力密度升高 ③ 粘度下降 ④ 酸碱滴定曲线改变 ⑤ 比旋度下降 ⑥ 生物活性丧失 (1)理化性质变化 2.因素 强酸，强碱，高温，高压，变性试剂如尿素以及某些有机溶剂如乙醇等。 本质是双链间氢键的断裂。 2、3了解即可 (2)增色效应： DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA的紫外吸收光谱 200 250 260 300 1.5 1.0 0.5 波长(nm) 吸光度值 变性状态 天然状态 了解即可 (3)Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度为横坐标，以吸光度A260为纵坐标作图，所得的曲线称为解链曲线。 76 80 84 88 92 96 100 ℃ OD260 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 Tm 为什么？ (二)复性 1.DNA复性(renaturation)的定义 (3)减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 (1)当变性因素去除后，变性DNA的