石蜡包埋组织中RNA提取方法的改进和完善.pdfVIP

第30 卷 第3 期 贵 阳 医 学 院 学 报 ol 30 No 3 2005 年6 月 JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE 2005. 6 石蜡包埋组织中RNA 提取方法的改进和完善 孟 青，杨文秀，胡 军，高 勤 （贵阳医学院病理学教研室，贵州 贵阳 550004 ） ［摘 要］目的：建立和完善石蜡组织RNA 提取的方法。方法：收集临床病理诊断用石蜡包埋组织块共100 例， 经RNA 灭活处理后，进行组织切片、脱蜡、清洗、消化等一系列提取前预处理，用TRIZOL 试剂提取组织的RNA ，并 在- 20 C 长时间沉淀RNA 。对提取的RNA 以核酸测定仪检测RNA 的浓度和纯度，并通过RT-PCR 检查提取RNA 的 -actin 基因，以检测提取RNA 的质量。结果：100 例石蜡包埋组织中提取的RNA 经过核酸测定仪测定后，浓度 ! 在20 ~ 50 mmoi/ L ，260 nm 及280 nm 光密度比在1. 75 ~ 2. 0 ；经过RT-PCR 反应，提取的RNA 都能扩增出190 bp 的 !-actin 目的片段。结论：通过RNA 提取前对材料的一系列合理处理，从福尔马林固定、石蜡包埋档案组织材料中 提取小片段RNA 进行目的基因mRNA 检测，可以成为一种稳定成熟的方法应用于临床病理诊断。 ［关键词］RNA ，肿瘤；石腊包埋；逆转录聚合酶链反应 ［中图分类号］ ［文献标识码］ ［文章编号］ R730. 23 A 1000-2707 （2005 ）03-024 1-03 The Improvement of Isolation Technigue of RNA from Formalin-fixed and Paraffin-embedded Tissues MENG Oing ，YANG Wen-xiu ，HU Jun ，GAO Oin （Dep artment of Pathology ，Guiyang Medical College ，Guiyang 550004 ，China ） ［Abstract］Objective：To improve the technigue for extracting RNA from formaiin-fixed and paraffin- embedded tissue. Methods：Sampies of 100 cases that diagnosed pathoiogicaiiy were coiiected. After some pretreatment such as deparaffinage ，washing ，digestion ，totai RNA were extracted from these tis- sues with TRIZOL reagent and ，then ，kept at - 20 C for iong time （above 2 h ）to settie RNA. The pureness and content of these RNA extracts were assayed with a nucieic acid detecting instrument and the guaiity of the extracts was tested with detecting of gene !-actin with RT-PCR. Results：The con- centration of RNA in the extracts were between 20 ~ 50 mmoi/ L. The ratio of 260 nm/ 280 nm were be- tween 1. 75 ~