本科论文_细脚拟青霉发酵液中清除DPPH自由基活性物质的分离和制备.docVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………………2 关键词………………………………………………………………………………………………2 前言…………………………………………………………………………………………………2 1 材料与方法………………………………………………………………………………………3 1.1材料……………………………………………………………………………………………3 1.1.1供试菌株……………………………………………………………………………………3 1.1.2常用培养基…………………………………………………………………………………3 1.1.3显色剂………………………………………………………………………………………3 1.1.4主要仪器……………………………………………………………………………………3 1.2 研究方法………………………………………………………………………………………4 1.2.1供试菌株液体种子的准备……………………………………………………4 1.2.2发酵罐培养与发酵液的处理………………………………………………………………4 1.2.3清除自由基活性模型……………………………………………………………………………………………………………………………………………5 2.结果与分析………………………………………………………………………………………7 2.1活性组分的初步确定………………………………………………………………………………………………………………8 2.3 样品Ⅰ的凝胶柱色谱和活性追踪……………………………………………………………9 2.4样品的纯度鉴定: ……………………………………………………………………………10 2.4.1 TLC检验……………………………………………………………………………………10 2.4.2高效液相色谱分析………………………………………………………………………11 2.5 样品的活性验证……………………………………………………………………………12 3.讨论……………………………………………………………………………………………12 参考文献…………………………………………………………………………………………12 致谢………………………………………………………………………………………………13 英文摘要…………………………………………………………………………………………14 细脚拟青霉发酵液中清除DPPH自由基活性物质的 分离和制备 作者：王伟 指导老师：樊美珍 （安徽农业大学生命科学学院2003级生物科学二班，安徽合肥，230036） 摘要:本文对一株细脚拟青霉菌株P6发酵液中清除DPPH自由基活性物质进行了研究,将发酵液选择45℃减压浓缩到一定体积，采用70％乙醇醇沉去除大分子适当浓缩后用不同有机溶剂萃取处理，采用TLC- DPPH（二苯基苦基苯肼）薄层层析法和DPPH自由基酶标仪法对发酵液及其提取物中清除DPPH自由基活性物质进行定性和定量检测。结果表明，在起始反应浓度为5.0 mg/ml时的有机萃取相中，乙酸乙酯与三氯甲烷萃取相组分的活性最高，对DPPH的相对清除率分别为71.6 %，66.3 %；且与水相的抑制率也基本互补。因此，初步判定发酵液的脂溶性活性成分主要存在于乙酸乙酯相。对乙酸乙酯相中的活性成分进行分离、制备后，得一较纯组分P6-01，经活性测定，在反应浓度为0.5mg/ml时，于37℃下保温10min时对0.4mg/mlDPPH自由基清除率为78.5％。 关键词：虫草 无性型 次生代谢产物 前言 细脚拟青霉（Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson）是一种世界性分布的虫生真菌，在国内常见寄生于南方森林中鳞翅膜昆虫的蛹和幼虫，被认为是虫草的无性阶段[1]。由于虫生菌与昆虫的长期协同进化关系，近年来虫生菌被认为是最有可能从中发现新型生物活性物质的类群，有关研究受到世界各国的广泛关注[2]。目前对细脚拟青霉的研究主要有如下几方面：一、单纯的生物活性研究，如苏银法等（1996））细脚拟青霉总多糖对大鼠非特异性免疫调节作用Kikuchi et al，2004) 。二、单纯的成分研究，如陈祝安和徐珊（1989）和陈召南（1992）等曾分别对细脚拟青霉的固体培养物与天然冬虫夏草的氨基酸、甾醇类、糖醇和生物碱等成分进行过比较分析；Kikuchi 等（2004）报道了一种单端孢烷和烯类骨架的新化合物 Tenuipesine A 和Spirotenuipesine A和B 。三、活性成分的鉴定。泰国学者