免疫抑制剂代谢相关基因多态性检测芯片的研制及其在肝移植患者中的应用.pdfVIP

第4卷 第3期 器官移植 V01．4 No．3 2013年 5月 OrganTransplantation May．2013 · 实 验 研 究 · 免疫抑制剂代谢相关基因多态性检测芯片的 研制及其在肝移植患者中的应用 姜楠 李洋 胥顺 傅斌生 汪国营 李华 汪根树 张剑 杨扬 陈规划 【摘要】 目的 建立一种快速、准确的检测免疫抑制剂常见代谢相关基因多态性的微阵列芯 片技术，明确肝移植供、受体细胞色素P450家族细胞色素3A5 (cytochromeP4503A5，CYP3A5)及 多药耐药 1(multidmgresistance1，MDR1)基因多态性对术后患者他克莫司 (FK506)浓度 ／剂量比 (C／D)的影响。方法 选取CYP3A5和MDR1基因外显子的8个常见变异基因位点 (CYP3A5Exonl、 Exon2、Exon3、Exonl3和MDR1Exonl、Exonl2、Exon21、Exon26)设计特异性野生型、突变型引物 检测探针 ，通过AD3200微阵列芯片点样仪点样于醛基基片上，室温保湿过夜 固定。采用该基因芯片 对 109份肝移植供、受者全血标本进行检测，每份样本重复检测 3次，GenePix4100共聚焦扫描仪阅 读芯片，GenePixPro410芯片图像分析软件分析结果 ，根据同一检测位点野生型探针和突变型探针在 阴阳性状态的信号值 比值来确定探针的切值 (cut-off值)。引物探针和样本微阵列芯片检测结果与脱 氧核糖核酸 (DNA)测序作比对进行验证。进一步分析临床资料完整的32例肝移植患者，比较供、 受体 CYP3A5和MDR1基因多态性对患者FK506C／D值的影响。结果 芯片样点分布均匀、清晰、规 整度好、无漏点和连点 ，突变型探针和野生型探针的荧光信号强度区分明显；按照突变型探针和野生 型探针的荧光强度 比值设定 cut—off值 ，结果易于判断，芯片检测结果与测序结果符合率高达99％。供 体 CYP3A5基因Exon3第6986位点 A／G单核苷酸多态性 (CYP3A5 3)与FK506C／D值有关，术后 2、4、12周供体 CYP3A5 1／ 1和 1／ 3型患者的FK506C／D值明显低于 $3／$3型患者 (均为 P0．05)，而供 、受体 CYP3A5其它基因型及供受体 MDR1各基因型组间FK506C／D值相比差异无 统计学意义 (均为P0．05)。结论 供体CYP3A5基因第6986位点携带 1等位基因的患者需更高 剂量FK506才能达到 目标血药浓度。CYP3A5和 MDR1基因多态性的微阵列芯片技术的检测效果理 想 ，可重复性强，为肝移植术后免疫抑制剂的个体化用药提供可靠的参考指标。 【关键词】 微阵列芯片技术；寡核苷酸序列分析；基因位点；他克莫司；细胞色素3A5； 多药耐药基因 【中图分类号】R617 【文献标志码】A 【文章编号】1674．7445(2013)03—0002—09 Developmentofachip fordetectingimmunosuppressantmetabolism associated geneticpolymorphism anditsapplicationin livertransplantationpatients JIANGNan ，LIYang XUShun FUBin—sheng， WANGGuo—ring，LIHua，WANGGeng—shu，ZHANGJian，YANGYang，CHENGUl-hua． Departmentof LiverSurgeryand rTransplantationCenter，theThirdAffiliatedHospitalof Sun Yat—senUniversity． TransplantationResearch Instituteof SunYat-senUniversity，OrganTransplantationResearchCenterof GuangdongProvince，Guangzhou510630，China Correspondinganther：CHEN Gui—hua。Ema