塞来昔布联合西妥昔单抗对人肠癌HCT-116细胞株生物学行为的影响.pdfVIP

J叠F孽 2012December，v。146N。6 ujianMedUniv … … … 385 塞来昔布联合西妥昔单抗对人肠癌 HOT一116细胞株生物学行为的影响 林梦心 ，陈 强 ～，陈奕贵 ，陈慧菁 ，范 芳 ，施纯玫 摘要 ： 目的 观察环氧合酶一2抑制剂塞来昔布联合表皮生长 因子受体单克隆抗体西妥昔单抗对人肠癌 HCT一116细胞株生物学行为 的影 响。 方法 Sanger测序法检测肠癌 HCT一1I6细胞株 的 K—ras基 因有无突变 ； 塞来昔布、西妥昔单抗单独或联合作用于 HCT-I16细胞株 ，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增值抑制率 ，细胞 划痕实验检测细胞的迁移能力，流式细胞术检测各组细胞 的周期分布 。 结果 HCT一116细胞株 K—ras基 因 12 位点为野生型、13位点发生突变 ；塞来昔布及西妥昔单抗对 HCT一116细胞 的增殖抑制作用均呈剂量依赖性，两药 联用可 明显抑制 HCT一116细胞 的增殖 ；塞来昔布组和联合用药组均能 明显抑制 HCT一116细胞 的迁移 能力 ，而西 妥昔单抗对细胞 的迁移能力无 明显抑制作用 ；塞来昔布组及联合用药组使 细胞发生 明显 的G。／G 期阻滞 (P O．05)。 结论 塞来昔布与西妥昔单抗单药可抑制肠癌 HCT一116细胞 的生长，两者联用具有协 同作用 。 关键词 ： 西妥昔单抗 ；塞来昔布 ；药物疗法 ，联合 ；HCT—ll6细胞株 ；表皮生长 因子受体 ；环氧合酶 2 中图分类号 ： R453；R735．3；R329．25；R916．4 文献标识码 ： A 文章编号： 1672—4194(2012)O6一O385一O7 随着肿瘤分子生物学 的发展 ，结直肠癌 的药物 (Celecoxib，Ce1)联合 EGFR抑制剂 Cet作用于人 治疗进入分子靶 向治疗 时代 。西妥昔单抗 (Cetux— 结肠癌 HCT一116细胞株 ，有可能增强 Cet的作用 imab，Cet)是重组人 鼠嵌合的 IgG1单克隆抗体 ，可 效果。 与表皮生长因子受体 (Epidermalgrowthfactorre— 1 材料和方法 ceptor，EGFR)胞外区特异性结合 ，阻止生长因子与 其受体结合 ，使受体失活 ，阻断下游 的信号转导通 1．1 细胞及主要试剂 人肠癌细胞株 HCT一116 路 ，从而影 响与肿瘤生长和转移相关 的细胞功能 ， (中国科学研究院)；McCoy’S5A Medium 培养基、 包括细胞增值 、存活 、DNA复制、肿瘤血管生长 、以 胎牛血清 (美 国Gibco公司)；西妥昔单抗 (cetux— 及细胞的迁移和侵袭等 。但 由于肿瘤 的发生发展 imab，5mg／mL，进 口药品注册证号 ：德 是一个多因素 、多环节 、多基 因靶点的调控过程，Cet 国默克公司)；塞来昔布 (Celecoxib)、MTT和二 甲 单药治疗进展期结直肠癌的有效率仅在 1O 左右 ， 基亚砜 (美 国 Sigma公 司)；LabsystemsMutisKan 仍难以满足临床需要 ，因此靶 向药物 的联合治疗研 Ascent全 自动酶标测试仪 (MK3型，芬兰 Iab— 究开始得到人们的重视 ，特别对于一种靶向药物 治 systems公司)；流式细胞仪 (EPICSXL一4型，美 国 疗相对不敏感的肿瘤 ，联合治疗可能是提高疗效 的 BeckmanCoulter公司)。 重要手段 。 1．2 方法 EGFR和环氧合酶一2(cyc1ooxygenases，COx一 1．2．1 基 因检测 (Sanger测序)从人肠癌 HCT一 2)信号途径均参与 了结直肠癌的发生与发展 ，而二 116细胞 中提取 DNA，PCR扩增 ，产物纯化 ，基因测 者在各 自信号通路之间存在着交叉对话 ，COX一2基 序，明确其 K—ras基 因 12及 13位点密码子 的突