人参三七提取物促血管生成的信号转导机制研究_田伟.pptVIP

人参三七提取物促血管生成的信号转导机制研究 田伟 雷燕 朱凌群 陈可冀 中国中医科学院西苑医院 北京中医药大学东直门医院 研究背景 益气活血中药治疗冠心病取得较好疗效，促血管生成可能是的重要机制之一 前期研究发现益气活血中药有促进血管生成、改善心肌缺血，增强血管内皮细胞增殖与迁移的作用，但其信号转导机制和作用靶标？ 研究背景 细胞信号通路是细胞应答内外环境信息，经信号网络整合作用调节基因表达及细胞增殖、分化、发育的途径。细胞的增殖、分化主要与有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径有关。Ras是调节细胞生长的重要转导蛋白，通过Ras-Raf-MAPK最后产生级联反应 观察人参三七提取物对血管内皮细胞血管生成信号蛋白的作用，以阐明益气活血药促血管生成信号转导途径 血管生成的过程 外因 —— 活化邻近的血管内皮细胞 血管内皮细胞分泌蛋白酶降解基底膜及细胞外基质 血管内皮细胞增生 血管内皮细胞改组形成小管，随后吻合成网状并注入血流 研究思路 中药促进内皮细胞增殖 信号转导机制 中药作用靶点 实验1 人参和三七不同配比、 浓度 、 时间对HUVEC增殖的影响 配比：1：1；1：2；2：1 浓度：0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、 2mg/ml、4mg/ml 时间：24h，48h 24h内皮细胞增殖直方图 人参三七提取物 配比：2：1 浓度 ：4mg/ml 时间：培养24h HUVEC增殖作用最强 实验2 人参三七提取物促VEC增殖 和分泌VEGF 实验分为5组 MTT 检测各组细胞增殖 ELISA 检测上清VEGF含量 人参、三七能够促进HUVEC增殖和分泌VEGF 实验3 人参三七提取物促VEC上VEGFR-2表达 免疫组化－SP法 实验4 人参三七提取物对血管生成 信号蛋白及其mRNA的影响 检测血管生成信号通路上VEGFR-2、Ras、 MAPK 蛋白及其mRNA表达 探讨益气活血中药干预后，对血管生成信号蛋白VEGFR-2、Ras、MAPK表达的影响 方法：western blotting ;RT-PCR 信号蛋白VEGFR-2 、Ras、 MAPK蛋白及其mRNA的表达 血管生成信号蛋白MARK及其-mRNA的表达 结果和结论 与空白组相比，中药大剂量组VEGFR-2、Ras 蛋白表达明显增强，小剂量组MAPK、Ras蛋白表达明显上调。bFGF组VEGFR-2、Ras、MAPK的表达显著增强，差异均有统计学意义（P0.05～P0.01） 人参、三七可促进血管生成信号蛋白 VEGFR-2 Ras MAPK的表达 可能是益气活血药促内皮增殖，产生血管生成效应的基础 以上三个信号蛋白的mRNA表达未见增加 实验5 SU5416阻断对VEGFR-2下游 信号蛋白的影响及中药干预 目的：观察下游信号蛋白 Ras/MAPK表达，明确中药 作用靶点 方法：加入半数抑制量的SU5416，对信号通路关键蛋白 VEGFR-2进行 IC50 阻断，中药干预 SU5416：VEGFR-2 酪氨酸激酶的抑制剂，能阻断来自细胞外血管生长刺激信号和已激活信号的转化通路 SU5416阻断后，Ras表达 A：空白组 B：SU5416组 C：SU5416+中药大剂量组 D：SU5416+中药中剂量组 E：SU5416+中药小剂量组 SU5416阻断后，MAPK表达 A：空白组；