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生物工程与下游技术知识点整理 第十三章 β内酰胺类抗生素 1、（掌握青霉素的性质并分析流程，会设计提取分离纯化的流程） 青霉素的理化性质 酸碱性：有一个酸性基团；解离常数pK值为 2.7； 溶解度： 青霉素是有机酸，易溶于醇，酸，醚，酯；氯仿是多种青霉素游离酸的很好溶剂；在水中溶解度很小，迅速丧失抗菌能力； 青霉素的金属盐易溶于水；易溶于低级醇；略溶于乙醇，丁醇，酮类，醋酸乙酯；含有少量水分时，溶解度大大增加；不溶于乙醚，氯仿，醋酸戊酯； 青霉素的分离纯化工艺（工业钾盐生产工艺流程）课本277页 发酵液，冷到10℃下， 1/3体积中性过滤，板框压滤或鼓式过滤， 10％硫酸调pH5，加PPB溶液（十五烷基溴化吡啶，絮凝剂），板框过滤或鼓式过滤，冲水量20－30％；滤洗液； 加1/3BA（醋酸丁酯），加PPB，10％硫酸调pH2－2.5，逆流萃取；得一次丁酯萃取液； 加0.3％活性炭搅拌10min，压滤， －10℃冷冻脱水，水分在0.9%以下，过滤得BA清液； 加温到15℃，加醋酸钾－乙醇溶液适当搅拌，结晶后静置1h以下，甩滤，得湿晶体； 湿晶体放洗涤罐，丁醇（4－6L/10亿）洗涤，乙酸乙酯（2L/10亿）顶洗，挖出粉子真空干燥；得青霉素G钾盐成品； 2、头孢菌素C （1）头孢菌素C性质：为两性化合物，C为氨基酸，水溶性很大，稳定性差； 大孔网状吸附剂从发酵液中初步分离头C，离子交换法纯化，络盐沉淀法结晶； （2）分离纯化工艺流程 头C发酵液，硫酸酸化，板框过滤，得头C滤液； 大孔网状吸附剂吸附，得饱和树脂；丙酮水溶液解吸，得一次头C解吸液； 阴离子树脂吸附，醋酸钠解吸； 加醋酸锌，得头C锌络盐结晶；板框过滤，得头C锌盐湿品； 气流干燥，得头C锌盐成品； （3）头C分离纯化工艺要点 A、发酵液预处理 发酵液冷到15℃以下，硫酸酸化到pH2.5－3，放置一段时间；板框或真空鼓式过滤机过滤，并用水顶洗滤渣；收集，合并滤液，洗液，低温10℃保存； B、 大孔网状吸附剂的吸附和解吸 头C最适吸附pH2.5－3，XAD4的吸附容量为15－20g/L； 2－4倍体积去离子水洗涤，除去硫酸根等阴离子，以免干扰离子交换树脂的纯化； 15－25％乙醇，丙酮，或异丙醇水溶液来解吸。 C、离子交换树脂的纯化 采用弱碱性阴离子交换树脂，树脂用醋酸溶液处理成醋酸型，开始吸附； 去离子水洗涤树脂，1.5－2.5％醋酸钠（钾）水溶液解吸； D、沉淀结晶 头C可与二价重金属离子铜锌钴铁铅Ni形成难溶性络盐微晶沉淀；锌盐最普遍； 头C锌盐，淡黄色微晶粉末，不溶于水及氯仿，甲醇，乙醇； 离子交换解吸液，放结晶罐中，5℃，加醋酸锌，搅拌溶解，加结晶液体积30％的乙醇或丙酮，析出头C锌盐微晶沉淀； 选择性较差，需在一定浓度下才能析出络盐结晶；只适用于纯化后的头C溶液； E、膜分离 发酵液通过微孔滤膜MF，除去菌丝，固形物； 超滤UF（除大分子物质），除去分子量10000以上的蛋白质，多糖，深棕色色素，获得色浅的头C滤液； 反渗透膜RO浓缩（除水） 3、克拉维酸的分离纯化 （1）萃取：溶剂萃取法 发酵滤液，盐酸调pH2，3/4体积正丁醇，多级逆流萃取，5℃萃取； 1/20体积水，用20％氢氧化钠水溶液调pH7；液液离心机，水相反抽提液； 浓缩洗脱液，5℃Zerolit?FFIP氯型阴离子交换树脂，0－0.35M氯化钠梯度吸脱，合并活性部分，减压浓缩； Amberlite?XAD4树脂脱盐，能吸附克拉维酸，不吸附无机盐；1％正丁醇或无盐水洗脱，混合活性部分，真空浓缩和冷冻干燥； （2） 离子交换：吸附于强碱性阴离子交换树脂上，用含盐水溶液洗脱； 发酵滤液，pH6.2，通过Zerolit?FFIP氯型强碱性阴离子交换树脂，冷的1mol/L氯化钠洗脱； 浓缩液，pH6，25℃的滤液，通过Amberlite?XAD4树脂，用0.1mol/L氯化钠洗涤，5℃无盐水洗脱； 脱盐浓缩液，离子交换色层分离；Zerolit?FFIP树脂氯型阴离子交换树脂，0－0.35M氯化钠梯度洗脱，5℃； 浓缩洗脱液，5℃Amberlite?XAD4树脂脱盐，混合活性部分，浓缩和冷冻干燥。 第十四章 氨基糖苷类抗生素 离子交换法分离纯化链霉素（强碱）的工艺 发酵液，1－2倍量水稀释，（高价离子在稀溶液中优先吸附） 草酸酸化，pH2.8-3.2， 加热70－75℃， 板框过滤或固体排出式离心分离，冷到15℃以下； 10%氢氧化钠中和pH6.7－7.2，110－Na型树脂吸附，得饱和树脂，水洗到澄清，5－6％硫酸洗脱；洗脱液； 401树脂吸附，得饱和树脂，先用无盐水挤压，再以8％硫酸单罐循环洗脱3－4次； 得二次洗脱液，1X14H型精制，330－OH型中和； 调pH4.3－5，0.2-3％炭，透光度9