本科毕业论文开题表.docVIP

四川农业大学本科生毕业论文（设计）开题报告 毕业论文（设计）题目 抗菌肽longicin基因真核表达载体构建及鉴定 选题类型 调研型 课题来源 自选型 学 院 生命科学与理学院 专 业 生物科学 指导教师 陈小玲 职 称 副教授 姓 名 杨志强 年 级 2008 学 号 开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献） 1.立题依据 蜱是一种专性吸血的体外节肢门寄生虫, 隶属于蜱螨目蜱亚目。蜱亚目包括三科: 硬蜱科、软蜱科及纳蜱科，其中大部分是硬蜱科[1]。全世界约有820种蜱[2]，中国约有110种[3]。蜱在传播细菌、病毒、原虫等引起疾病因子的能力仅次于蚊[4]。造成了来莱姆病、斑疹色、出血热、巴贝斯虫病等疾病，严重影响了家畜的生产生活和人类的健康。因此，防止蜱虫刻不容缓。长角血蜱是我国分布较为广泛的硬蜱类之一，它的宿主种类包括牛、马、羊等家畜和鹿、熊、兔等野生动物。现在研究大部分为长角血蜱的生活和防治，进而减轻馋、长角血蜱的危害，在分析长角血蜱的生活中发现，蜱生活在潮湿的生活环境，该环境同样有很多微生物、病原体等繁殖。但生理结构简单的蜱却能安然的生活在这种恶劣的环境中，研究人员发现时蜱体内的存在着抗菌多肽[5]，为蜱抵御着微生物的攻击[6]，同时引起了研究抗菌肽的热潮。 抗菌肽（Antibacterial peptide）又叫抗微生物肽（Antimicrobial peptide）、抗生素肽（Antibiotics peptide），是由多种生物细胞特定基因编码经外界条件诱导产生的一类具有广谱抗细菌、真菌、病毒、原虫、抑杀肿瘤细胞等活性作用的多肽 [8]，以及设计一种方法来调节动物体内自然抗菌肽的功能便显得极为重要，其中通过抗菌肽基因的克隆与表达而大量生产抗菌肽是一种较为直接而有效的方法。抗菌肽具有着独特的不同于抗生素的抗菌机理，它广泛在于多种生物体内，是生物体对外界病原物侵染而产生的一系列免疫反应的产物，具有较强的广谱抗菌能力[9]。寻找各种动物内源性抗菌物质，以现代生物技术方法工业化生产在抗病原菌上具有动物“种”专一性或特异性的系列产品，必将成为替代抗生素的新型饲料添加剂。 蜱身体里提取的抗菌肽longicin主要存在于中肠、唾液腺、血淋巴等组织中。Nakajima等[10]从非洲钝缘蜱中肠中克隆到了蜱抗菌多肽防御素，并发现蜱吸血后该抗菌肽的表达量增加，确定了该防御素与蜱的免疫力有关。唾液腺是蜱体内最重要的功能器官，也是蜱吸血和病原微生物传播的重要器官。蜱源抗菌多肽也被发现存在于唾液腺中。Zhou等[11]从长角血蜱唾液腺中分离获得了防御素抗菌肽，定量PCR检测结果表明该抗菌肽的表达具有组织特异性，但其物质表现的生物学活性与功能并不太清楚。现阶段研究抗菌肽多数使用真核表达系统，并使抗菌肽longicin基因在真核细胞真表达，最终获得了稳定的蛋白质肽。 酵母是一种单细胞低等真核生物,培养条件普通,生长繁殖速度迅速,用于表达基因工程产品时,可以大规模生产,有效降低了生产成本。酵母表达系统是研究真核蛋白质表达工具,拥有转录后加工修饰功能,适合于稳定表达有功能的外源蛋白质。酵母系统表达外源基因的优点在于：①酵母细胞是真核生物，能进行一些额外的外源加工，有利于保持生物产品的活性和稳定性；②遗传操作较为简单；③生产繁殖迅速，工艺简单，生产成本低[12]；外源基因在酵母中分泌表达，表达产物分泌至胞外不仅有助于纯化，而且避免了产物在胞内大量蓄积对细胞的不利。 本实验采用从长角血蜱中提取的抗菌肽longicin基因，对longicin在真核细胞中得以表达和对其产物的鉴定，其目的在于使抗菌肽能够进行大规模的生产和事真核细胞能够自我分泌出抗菌肽蛋白，有利于进一步研究靶基因镶嵌在动物体细胞中，使动物体能够有更好的免疫功能，为推动畜牧业有着极其重要的影响。 参考文献： [1]邓国藩. 1978. 中国经济昆虫志, 第十五册. 北京: 科学出版社,1-2.. [2]Wang H，Nuttall P A. Immunoglobu lin-binding proteins in ticks new target for vaccine development against a blood-feeding parasite[J].Cell Mol Life Sc.i 1999,56(3-4):286-295 [3] 赵辉元. 畜禽寄生虫与防制学[M] . 长春: 吉林科学技术出版社. 1996: 873. [4] 龚海燕,周金林. 蜱对宿主免疫调节作用的研究进展[J ] . 动物医学进展,2005 ,26(4) :34-38. [5]