低体系扩增技术在法医学中的应用综述(精品).doc

低体系扩增技术在法医学中的应用综述 亓冰1 张平1 张家栋1 钱静2俞卫东3胡兰4 （1.南京市公安局浦口分局，江苏 南京 211800;2.南京医科大学法医系，江苏 南京 210029；3.南京市公安局刑事科学技术研究所，江苏 南京210012；4.公安部物证鉴定中心，北京100038） 摘要：降低扩增体系是提高微量DNA扩增灵敏度的手段之一。本文主要介绍了低体系扩增技术及其在国内外法医学领域应用的研究进展，并对低体系扩增技术解决法医学难题的应用前景进行初步探讨。 关键词：低体系扩增技术；法医学；应用；展望 The Discussion of Low volume PCR in the Application of Forensic Science QI Bing1 ，ZHANG Ping1 ，ZHANG Jia-dong1 ，et al (1.Pukou Branch of Nanjing Public Security Bureau，Nanjing 211800，china) Abstract: Decreasing the volume Of Multiplexing PCR System is one of the means to raise the sensitivity of minute DNA analysis.This article introduced the Low volume PCR （LV-PCR）technology, and its applications in forensic science. The prospect of LV-PCR for solving some difficult problem of forensic science was also discussed here. Key Words：LV-PCR；forensic medicine；application；prospect 在众多的法庭科学实验室中DNA分析技术已经成为一个必不可少的工具。DNA分析技术可以通过对犯罪现场遗留的血迹、精斑、唾液斑、组织、毛发等生物检材的检验来认定和排除嫌疑人。目前常量生物检材的检验已不是问题，但在实际检案中经常会遇到一些微量疑难生物检材，如案发现场发现的痕量检材和降解检材，因此为了适应越来越多的低拷贝检材和降解检材，DNA扩增灵敏度亟待提高。改善方法主要有增加PCR反应循环数、减小反应体积、使用MiniSTR等[1-2]。通过不断提高灵敏度，许多微量检材中的DNA都能够检验出来并达到个人识别的目的。其中微量化反应扩增，即低体系PCR扩增（LV-PCR）已成为提高灵敏度，加快DNA分析速度经济而有效的方法。 低体系扩增技术主要是指扩增体系低于厂商标准扩增体系的扩增技术，例如10ul体系、5ul体系等，本文所阐述的低体系扩增技术体系特指1ul微量扩增体系。 低体系扩增技术是近几年发展起来的新技术，是一种小容量生物反应体系的技术，最初主要应用于分子生物学领域的单细胞分型、单细胞测序、与免疫分型和细胞表达和结合。目前国内外[3-7]已经有学者把这些技术应用于法医DNA检测中。 一、低体系扩增技术简介 在微量技术日益发展的今天，提高扩增灵敏度亟待解决，低体系扩增技术就是为适应这种要求而发展起来的高效、微量PCR技术。低体系扩增技术主要是使用化学修饰的显微玻片，使PCR反应体积缩小到1ul。国内外比较通用的低体系扩增体系主要是AmpliGrid System。AmpliGrid 1ul PCR系统是基于显微镜玻片平面印刷的专利技术，玻片表面构建多个1ul亲水性基因座，使DNA模板、反应混合物（master mix）锚定在此特定位置上，形成具有最佳半球状结构的反应空间，疏水性位点使覆盖在反应试剂上的油性封闭液互相隔离，保证PCR反应过程中无气溶胶产生、无交叉污染；AmpliSpeed热循环仪针对以玻片为载体的PCR反应系统而设计，采用高平整度的硅晶平面具有极好的热传导性能，同时1ul半球状的空间构象，提供了微量反应最佳的环境，使灵敏度大大提高[3]。 二、低体系扩增技术在法医学中的应用 （一）国外研究进展 国外关于低体系扩增技术做了许多研究，德国科隆大学C.Proff[3]教授和他的团队分别利用SEfiler(28cycles)和PowerPlexES（30 cycles）做了几千个1ul微量PCR（LV-PCR），通过对等位基因检出情况的统计分析后，认为（1）利用低体系扩增1-4pg的模板时，汇集20-30个平行低体系扩增的结果后再进行后续分析，可以获得有意义的DNA图谱；（2）单个细胞（约6pg）有21.7%成功分型率，9个细胞则达到了95.7%的成功率，其中4个细胞就可以