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罗曼：浅谈基因扩增仪检测技术 　　　６７ 　　　　　■ 浅谈基因扩增仪检测技术 罗　曼 （武汉市计量测试检定（研究）所，湖北 武汉４３００５０） 摘　要：随着基因扩增技术在实际工作中的不断运用和发展，本文从理论背景和实践操作等方面着手，联系基因扩增仪发展现状，浅析仪器温度校准的关 键参数及检测中发现的问题和建议。 关键词：基因扩增；示值误差；均匀度；过冲 中图分类号：ＴＨ７７　　　　　　文献标识码：Ａ　　　国家标准学科分类代码：５３０６７ ＤＯＩ：１０．１５９８８／ｊ．ｃｎｋｉ．１００４ －６９４１．２０１５．０３．０３５ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｔｈｅ Ｇｅｎｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｌｕｏ Ｍａｎ 　　当今，国内外在制药、食品、法医鉴定以及航空航天 ３）临床分子诊断试剂和生物试剂公司药品研发。（４） （ 等多个领域的基因检测仪器种类繁多，推陈出新，呈现设 转基因、微生物、动物源性成分检测，常见于医药卫生及 备功能集成化、复杂化和测量条件极端化等趋势，给计量 农产品检验领域。 检测工作带来一些新课题。 １　基因扩增技术的定义简介及应用领域 基因扩增技术是由美国生物学家凯利 ·穆利斯 （Ｋａｒｙ Ｍｕｌｌｉｓ）发明，并因此于１９９３ 年 １０ 月荣获当年的 诺贝尔化学奖。他发明的这项生物学技术成果可简述 为：在相关酶和引物存在的条件下，利用人工方法，通过 重复热循环过程，使特定基因得以不断复制。 具体的热循环过程，可分为以下三个阶段：（１）高温 变形９０℃ ～９６℃ＤＮＡ 双链受热变性裂解为２ 条单链 ＤＮＡ模板；（２）低温退火２５℃～６５℃两条人工合成的寡 图１　标准ＰＣＲ循环温度曲线 核苷酸引物与互补的单链 ＤＮＡ 模板结合，形成部分双 ２　基因扩增仪器的发展历程 链；（３）适温延伸合成６８℃～７５℃在Ｔａｑ 酶的合适温度 随着基因扩增技术的不断发展，各类基因扩增仪相 ７２℃下，引物沿模板方向延伸，合成完整的ＤＮＡ 新链。 继进入人们的视野。依照该项技术发展的成熟度，基因 这样每增加 １ 个热循环，ＤＮＡ 含量即增加１ 倍。ＰＣＲ产 扩增仪器大致发展到目前的第四代：第一代为手动／机械 物以２ 的指数形式迅速扩增，经过２５～３０个循环后，便可使ｎ 手式水浴式基因扩增仪；第二代为自动控制型定性基因 特定基因的数量扩增１０ 倍以上，获得大量的目标基因。９ 扩增仪；第三代为定时定量基因扩增仪；第四代为数字 由于这项技术灵敏度高，操作起来简便、快捷，加