体外诱导扩增γδT细胞对人急性髓系白血病细胞杀伤作用与机制研究.pdfVIP

·220· of 中国实验血液学杂志JournalExperimentalHematology2011增刊 K562细胞有七种NK配体的相对表达量在八种细胞系中表面粘附分子或共刺激信号的配体表达在ALL和AML 为最高，其中，MICB和CD80配体的相对表达远高于之间互有高低。本研究为深入揭示NK配体与肿瘤细胞 其他七种细胞系，这与K562细胞对N蜘胞极其敏感有免疫逃逸的关系打下了基础，如何利用白血病细胞NK 着密切的关系。活化性NK受体NKG2D的配体在ALL配体表达的特点，人为进行干预以提高其对NK细胞的 细胞系中的相对表达量总体高于AML细胞系，而细胞 敏感性值得深入研究。 B283 5 体外诱导扩增的y T细胞对人急性髓系白血病细胞的杀伤作甩 及机制研究 吴康妮胡永仙傅华睿盛立霞黄河 浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心 杭州 310003 8 目的：探讨体外诱导的人外周血来源的^yT细胞 天纯度达近50％，第14天纯度可达90％以上。台盼蓝染 杀伤人急性髓系白血病(AML)细胞的潜能及机制。 色计数活细胞总数可达1×108以上。诱导扩增14天的 6 方法：6T细胞的体外诱导扩增方法为：抽取10rnl健1 T细胞与luMCFSE标记的白血病细胞分别以5-1、 康供者外周血，分离单个核细胞，第1天使用唑来膦酸 500 IU／ml维持，2—3天弃半 2ug／ml诱导，之后以IL-2 量换液一次。在第7天及第14天通过标记TCK^y8抗体 8T细胞对不同亚型的AML细胞株及蒽环类耐药细胞 8 流式检测诱导扩增的1 T细胞纯度，台盼蓝染色计数 株具有不同程度的杀伤作用，这种杀伤作用可随效靶 M2 8 活细胞总数。以Kasumi-1、HL-60细胞株为AML比例的增加而增强。1 T细胞作用4h即显示对白血病 亚型代表，NB4细胞株为AMLM3亚型代表，K562细胞细胞的杀伤作用，作用8h时可提高对大部分细胞的杀 8T细胞4h对Kasumi一1、 株为AMLM6亚型代表，以HL60／ADK、K562／A02细伤率。当效靶比为20：1时，1 胞株为AML化疗药物耐药型代表。细胞杀伤毒性试验 8 CFSE 方法为：将诱导扩增14天后的1T细胞与luM 标记的Kasumi一1、HL60、HL60／ADR．、NB4、K562、13．47％±10．36％、17％±1I．01％、29．53％±12．220／6、26． K562／A02细胞，分别以5：1、10：1、20：1比例共同孵育4％±o．71％。当作用至8h时，杀伤率可分别增加至56． 4或8d,时，7一AAD染色15分钟后流式上机检测，杀伤 率的计算为CFSE阳性7-hhnFEt性细胞／CFSE?,日性细胞 8T细胞与白血病细胞以10：11：L例 8T细胞 的比例×100％。将-y 空白对照组比较Po．05)。而同等情况下1 共同孵育24h，相差显微镜下观察被杀伤白血病细胞的 对正常骨髓单个核细胞8h的杀伤作用仅为6．92％±1． 8 8 形态。进一步观察细胞间相互作用采用绿色荧光细胞 41％，表明．yT对正常细胞不具备杀伤作用。以7 8 示踪剂CFSE标记^yT细胞，红色亲脂性膜荧光染料 T细胞杀伤敏感的Kasumi一1