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第 卷第 期 印染助剂 24 1 年 月 20071 TEXTILE AUXILIARIES Jan.2007 以ABTS 为底物测定漆酶活力的方法 张 鹏 中国纺织科学研究院北京中纺化工有限公司 北京 , 100025 摘 要:以2,2′-连氮-双 3-乙基苯并噻唑-6-磺酸 简称ABTS 为底物,采用分光光度计在420nm下测定漆酶活力,研究了 酶活测定条件对酶活值稳定性的影响,确定了测定漆酶活力的方法:选择漆酶适宜的温度和pH,适当稀释漆酶 使漆酶稀释液的活力 为27.7~55.3U/mL ,测定漆酶催化分解0.5mmol/LABTS使吸光度值从0.15增加到0.20所经历的时间t,改变稀释倍数使t值在 10~ 20s,根据相应的公式计算漆酶活力 漆酶活力误差为3% . 关键词:漆酶;酶活;分析方法 中图分类号:Q55 文献标识码:C 文章编号:1004-0439 2007 01-0043-03 ZHANG Peng : Abstract testerroroftheenzymeactivitywas3%. : Keywords laccase; enzymeactivity; testmethod 测定漆酶活力是评价漆酶性能以及保证生产中 的误差有多大对时间历程曲线是直线的判断方法没 ; 漆酶稳定性的常用方法 不同来源的漆酶与底物反应 有明确 而用眼睛判断又有很大误差 而且用任意 点 . , ; 2 的亲和力不一样 即使是同一来源的漆酶 底物不同 计算该直线的斜率也会带来很大的误差 , , , . [1] 反应的亲和力也不同 测得的酶活数值也不同 因此 为了寻找更简便、更稳定、重现性好的漆酶活力 , . , 目前还没统一的测定方法在 波长下 以 测定方法 本试验参照已经标准化的其他酶活力测定 . 420nm , ABTS , 为底物测定吸光度值的变化来确定酶的活力是常用 方法 研究新的漆酶活力测定方法 底物采用 波 , . ABTS, 的方法[2,3] 长采用 . 420nm. 在一定稀释倍数 此稀释倍数能保证 内吸 4min 1 试验 光度值的时间历程曲线呈直线 下 何为等按朗伯 比 , - 尔定律在吸光度值的时间历程曲线上任取 点 求取 材料及仪器 2 , 1.1 [2] 斜率 然后计算酶活力 此方法对稀释倍数要求比较 试剂 漆酶 固体粉末最适温度 最佳 , . : Q1 , 25℃, pH 高 在相近的稀释倍数下 作者没有确定酶活力测定 漆酶 透明液体 最适温度 最佳 7.0 , , , Q2 , 50℃, 收稿日期:2006-08-14 作者简介:张 鹏 男河南省济源市人 工程师 学士 主要从事纺织生物研究 1978- ,, , , , . 44 印 染 助 剂 24卷 连氮 双 乙基苯并噻唑 磺酸 简称 值从 增加到 经历的时间 2,2′- - 3- -6- ABTS, A A ,s. 1 2 公司 漆酶催化分解 的时间历程 sigma . 2.2 ABTS 仪器 型分光光度计 北京瑞利光学仪器 产物 自由基对酶的催化反应有抑制作用 :UV9200 ABTS , 厂 漆酶的催化活性会不断降低 因此 测定酶活力时的 . . , 漆酶酶活力的测定原理 时间不能无限制的延长 应该确定为时间历程曲线是 1.2 , [1] 漆酶分解 的产物为 自由基 然而在 直线的时间 在直线段 酶的稀释倍数对酶活值的影 ABTS ABTS , . , 处 自由基的吸光系数远大于底物 响小测定的酶活力稳定性好 420nm ABTS ABTS. , . 随着 自由基浓度的增加 吸光度值变大 吸光度 采用漆酶 催化分解 的 记录 ABTS , . Q1 1mmol/L ABTS, 6 值在某一规定范围内变化时所经历的时间表示为漆 内吸光度值的变化 见图 min , 2. 酶的活力. 1.3 酶活力单位定义 一个漆酶单位 是 转化 使 U 1min 1μmolABTS, 产物 自由基浓度从 增加至 ABTS a b. 1.4 酶活力测定方法 底物溶液预先在合适的温度下预热测定时取 . 2.9 底物溶液 加入 稀释后的酶液 记录吸光度 mL , 0.1mL , 值从一点 变化到另一点 的时间然后根据酶活 A A , 1 2 力定义计算酶活力 从图 看出时间历程曲线是直线的时间段在 . 2 , 20~ 另外 酶活力实际上是酶催化反应的初速度 但 120s. , . 2 结果与讨论 在试验测定时 时间趋向于零时的测定都有很大的误 , 自由基浓度跟吸光度值的关系 差 所以 一般酶活力测定都采用最初时间段内的平 2.1 AB