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实验九 果蝇的三点测交 一、实验目的 1、掌握三点测交的原理及方法； 2、学习三点测交的数据统计处理及分析方法； 3、了解绘制遗传学图的原理和方法 二、实验材料 五、实验步骤 1、选处女蝇：每组正、反交各1瓶，在8-12h内收集处女蝇5-6只，可提前2-3天收集。 2、杂交：将处女蝇、雄蝇各5-6只，麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，注明杂交组合、日期、姓名，于25℃培养； 3、释放亲本：7d后，处死杂交亲本（一定要干净） 。 4、观察F1：再过4-5天，F1成蝇出现，连续观察2—3天，或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。 要求每组至少统计250只果蝇。 六、实验报告 1、将观察到的F2代（包括正交和反交）各表型个体数填入书本P17表5-1中，确定基因间重组发生的情况； 2、计算基因间的重组值及双交换值； 3、根据计算结果画出遗传学图。注意用双交换值对位于两端的基因间距离进行校正； 4、计算并发系数和干涉值。 * 《遗 传 学》校 级 精 品 课 程 * 湖州师范学院 生命科学学院生物系 雌 雄 黑腹果蝇 Drosophila melanogaster 品系： 野生型果蝇（+++）： 红眼、长翅、直刚毛 三隐性果蝇（wmsn3）：白眼、小翅、焦刚毛 三隐性个体： 白眼（w）、小翅（m）、焦刚毛（sn3）， 这三个基因都位于X染色体上。 三、实验仪器设备、药品 体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。 乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。 位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数量的重组型。 重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。 而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的高低与基因间的距离有一定的对应关系。 基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。 如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因图距。 四、实验原理 三点测交：用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因子杂种（F1），再使F1与三隐性基因纯合体测交，通过对测交后（Ft）代表现型及其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的交换值，从而确定这三个基因在同一染色体上的顺序和距离。 通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生的双交换。 四、实验原理 四、实验原理 如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换，那么预期的双交换频率应当等于两个单交换频率的乘积，但实际上观察到的双交换值往往低于预期值，因为每一次发生单交换，它邻近也发生一次交换的机会就减少，这叫干涉。一般用并发率表示干涉的大小。 并发率＝ 观察到的双交换频率 两个单交换频率的乘积 + + + m sn3 w m sn3 w × m sn3 w m sn3 w m sn3 w + + + × （♂） ♀ （♂） ♀ m sn3 w + + + m sn3 w + + + m sn3 w + + + m sn3 w m + + + sn3 w + + + m sn3 w m sn3 + + + w + + + + sn3 + m sn3 w m + w + + + P： F1： （测交） 四、实验原理 雄蝇产生两种配子 雌蝇X染色体上三对基因之间 发生交换重组，产生8种雌配子 因为F1代雄蝇为三隐性个体，所以F1代雌雄蝇自交时，即测交，F2（Ft）代可以得到8种表型。 F2 （Ft）中亲组合最多，而发生双交换的表现型个体数应最少。 四、实验原理 4、 F1互交：选取5-10对F1果蝇，转入一新培养瓶（不需处女蝇，正交和反交F1不能混），贴好标签，于25℃培养。 5、释放亲本： 7d后，杀死F1代亲本果蝇。 6、观察F2： 再过4-5d，F2成蝇出现，开始观察眼色，翅形及刚毛形态，同时记录F2各种性状果蝇的数目 ，连续统计7-8d。 注意：（1）要求每组至少统计250只果蝇。 （2）如果做正交只需统计雄性个体。 （3）统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死 。 五、实验步骤 七、思考题 正交组合F2统计为什么只需统计雄性个体？其雌性个体F2代个体的表型如何？ * 《遗 传 学》校 级 精 品 课 程