阿德福韦酯规范治疗停药后复发慢性乙型肝炎患者的病毒准种分析.pdfVIP

阿德福韦酯规范治疗停药后复发慢性乙型肝炎患者的 病毒准种分析 摘 要 目的：口服核苷(酸)类似物(nucleot(s)ideanalogs，NAs)是目 前持久抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的主要药物，NAs治疗后乙型 肝炎复发的问题越来越引起广泛重视。HBV在体内以准种的形式分布 和存在，准种多态性对停药后复发患者再治疗的疗效及病情转归有重 要影响。目前，对NAs治疗停药后复发再治疗的研究主要集中于拉米 夫定，对于阿德福韦酯等其他NAs的研究较少。国内临床研究仅提示 使用阿德福韦酯规范化治疗停药复发的慢乙肝患者再次使用阿德福 韦酯仍然有效，而对于复发患者体内乙肝病毒准种构成的研究则未见 报道。本研究以单用阿德福韦酯规范化治疗停药复发的慢性乙型肝炎 患者和未经过抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者为研究对象，全面分析 阿德福韦酯规范化治疗停药后复发患者体内病毒准种的准确构成；对 比停药复发患者与未抗病毒患者体内病毒准种构成的差异，为阿德福 韦酯规范化治疗停药后复发患者的再治疗提供病毒学依据。方法：收 集阿德福韦酯规范化治疗停药后复发的慢乙肝患者及未抗病毒治疗 聚酶的逆转录区(reverse 续行琼脂糖凝胶水平电泳，以分离目的DNA片段；胶回收纯化目的 1 DNA片段，将其连接到T载体上，转入处于感受态的TOPl0大肠杆 30个阳性克隆，过夜培养后的茵液送至上海L／retechnology公司测定 T载体上插入的目的DNA片段序列；测序结果由DNASTAR SeqMan 拼接去除无关序列，以进行进一步的序列分析，包括去除载体序列、 多序列比对、找出耐药突变位点、计算准种复杂度和准种多样性、进 化树分析等；采用SPSS19．0对结果进行统计分析。结果：1．停药 复发组(n=25)与未抗病毒组患者(n-16)的乙肝病毒准种中野生株 的比例均大于93．33％，野生株均为优势株。停药复发组中含有耐药突 变的克隆与野生克隆之比为10／740，未抗病毒组中含有耐药突变的序 列与野生序列之比为8／472，卡方检验得出P0．05，两组间的差异无 统计学意义。 ．：P值分别为 复发组与未抗病毒组的准种多样性(d、dS、dN)比较， 意义。3．对慢性乙型肝炎患者的准种复杂度及准种多样性(d、舔、柳) 度及准种多样性与血HBV-DNA水平无相关性。4．所有样本中检测到 ’ 病毒组的患者的血清中也能检测到如下已知的耐药突变：rtll69V、 清中检测到1个含有阿德福韦酯耐药突变(rtAl81V)的克隆。5．巢式 PCR扩增的RT基因直接测序的结果中未发现已知耐药突变位点的存 在，均为野生株序列；而巢式PCR扩增RT基因TA克隆后测序的结果 中发现上述多种已知耐药突变的存在。6．停药复发组患者与未抗病毒 组患者在进化树中并无明显聚集特征，序列间遗传距离相近，均小于 O．04。结论：1．使用阿德福韦酯规范化治疗后停药复发的慢乙肝患者 体内准种中的优势株仍为野生株，与未抗病毒治疗的慢乙肝患者在准 种复杂度和多样性上并无统计学差异。停药复发患者再次使用阿德福 韦酯治疗仍然有效。2．未行任何抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者体内 仍然存在耐药突变株；TA克隆后测序与直接测序相比能更好的了解 体内病毒的组成及是否存在耐药突变。 关键词：阿德福韦酯；慢性乙型肝炎；复发；准种 l Thn ofthethe withchrq uaslspecnesanalystsrelaosedpatientschronic quasislanalysisrelapsedpatient：with Bafteradefovir standardtreatment hepatitis dipivoxil