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192 中国科学 C 辑 生命科学 2005, 35 (3): 192~ 195
Tet-on 基因表达系统转染胚胎干细胞
和调控效应检测*
**
王 彦 丛笑倩 刘德莉 张文杰 崔 磊 刘 伟 曹谊林
(上海第二医科大学第九人民医院整复外科 上海市组织工程研究重点实验室, 上海 200011)
摘要 以荧光素酶基因为目的基因, 应用Lipofectamine 介导的瞬时转染方法, 将pTet-on 调控
质粒和pTRE2hyg-luciferase 表达质粒共转染小鼠胚胎干细胞, 滴加系列浓度的DOX 后, 观察其
诱导效应. 结果显示, 随DOX 浓度升高, 荧光素酶的活性也逐渐增强; 而未转染细胞与转染细胞
未加诱导剂时, 其RLU 值均接近空白对照. 表明转染Tet-on 基因表达系统的胚胎干细胞对DOX
诱导有较好的反应性, 目的基因的表达与DOX 具有严格的剂量依赖关系.
关键词 基因表达 胚胎干细胞
胚胎干细胞(ESc, embryonic stem cells)具有的无 TetR 和四环素操纵子序列TetO)与四环素衍生物强力
限增殖能力和多向分化潜能使其成为目前医学领域 霉素(doxycyline, DOX)组成. DOX 可启动下游基因的
的研究热点, 而胚胎干细胞这些特征的维持与 Oct-4, 转录和表达, 且呈剂量依赖性. 用作诱导剂的 DOX
[1,2]
mTOR 等一系列基因的表达与否关系密切 . 同时, 在临床上普遍使用, 在效应浓度下对细胞没有毒性,
胚胎干细胞的体内外分化也牵涉到 cyclinD, TGF-b , [7]
1 不影响细胞的正常生长与代谢活动 .
[3~5] 特异性 高效
VEGF 等众多基因表达的改变 . 为研究胚胎干细 Tet-on 基因表达系统具有严密性
胞生理过程中众多基因的功能, 我们需要一个适宜 性等优点, 已广泛应用于细胞 转基因鼠的基因功能
[8~10]
的调控系统来控制目的基因的表达. 及基因治疗等方面的研究 . 但将Tet-on 系统应用
Tet-on 基因表达系统为目前比较理想的真核基 于胚胎干细胞的研究尚未见报道. 本实验中, 我们对
[6] 该系统调控目的基因在小鼠胚胎干细胞中的表达进
因表达调控系统 . 该系统由大肠杆菌 Tn10 转座子
中四环素阻遏操纵子的两个部件( 四环素阻遏蛋白 行初步观察, 探讨其应用于ES 细胞的可行性.
2005-01-06 收稿, 2005-04-23 收修改稿
* 国家重点基础研究发展规划项目(“973”项目)(批准号: G1999054304) 上海市科学技术委员会科研计划项目(批准号: 03DJ14021)和上海市“重
中之重”重点学科基金资助
** 联系人, E-mail: yilincao@
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第3 期
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