复元胶囊对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶12信号通路的作用的研究.pdfVIP

旦!』!煎笠复丞膣囊型筮量绁墅遇立塑堕处信竺翅堇蛋臼邀酸!丝信曼适蹬丝往旦堑塞筮堡塑 ·329· 复元胶囊对软骨细胞凋亡细胞外信号调节 蛋白激酶1／2信号通路的作用研究 周小莉 李荣亨 (重庆医科大学附属第一医院中西医结合科，重庆400016) [摘要]目的观察复7亡胶囊对体外原代培养软骨细胞凋亡的影响及对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶(ex乜aceHularsisnalregulated 榆测其对软骨细胞凋亡的影响，免疫印迹技术(Western caspase-3因子而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡。 【关键词) 软骨细胞；细胞凋亡；细胞外信号调节蛋白激酶I／2；中药治疗 (中图分类号]R285．5(文献标识码】A (文章编号]1005-9202{2008)04-0329-03 胶囊，仅供实验使用。SNP为北京双鹤现代医药技术有限责任 骨关节炎(Osteoarthritis，OA)是中老年人最常见的一种慢 性、进行性关节疚病。软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞，在 公司产品，批号：H111021635。 软骨形成、代谢以及修复中起着极其重要的作用¨J。研究发现 1．3主要试剂 在骨关节炎病变过程中有软骨细胞凋亡的特征性形态，如染色 质凝聚、核碎片、细胞皱缩、凋亡小体等，软骨细胞凋亡已被认 为是关节软骨退行性改变的病理因素之一【2．3J。有学者报道， 物公司)、AnnexinV—FITC试剂盒(晶美生物工程有限公司)、磷 在NO供体硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡信号转导过程 ki． 中，细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignalregulated 内参3-actin(SantaCruz公司)、PBS缓冲液和辣根酶标记兔抗 nase，包括ERKl和ERK2)信号通路能抑制凋亡信号的传导，抑 山羊I蜘二抗(北京中山生物技术有限公司)、免疫印迹化学发 制软骨细胞的过度凋亡，而用ERKl／2特异性抑制剂U0126阻 断ERKl／2信号通路可促进软骨细胞的凋亡【4】。复元胶囊是比色法检测试剂盒(BioVision公司)。 临床上长期用于治疗骨关节炎有效的经验方复元汤研制而成 1．4方法 的中药实验制剂，但是其分子水平的作用机制尚不十分清楚。 1．4．1软骨细胞的分离、培养及传代参照文献’，将3W龄 本实验通过建立软骨细胞体外培养体系，观察复元胶囊血清对 sD大鼠断颈处死后，无菌条件下分离股骨头，尽量剔除周围组 SNP诱导的软骨细胞凋亡的影响，并从信号转导的角度，检测 织，浸入含青霉索和链霉索的双抗水中漂洗3次，FD培养基中 了参与软骨细胞凋亡信号转导的磷酸化ERKI／2及其下游靶 漂洗3次，再次清除软骨周围附带组织；将软骨剪成1nlnl3大 基因p53蛋白质的表达和凋亡执行因子caspase-3的活性，并观 min；胎牛血 小，移入0．25％胰蛋白酶中，37℃水浴箱中消化30 察ERKI／2特异性抑制剂130126阻断ERKl／2信号通路后上述 清终止消化，PBS缓冲液清洗2遍；再加入O．2％II型胶原酶， 指标的变化，旨在研究中药复元胶囊抑制软骨细胞凋亡的分子 37。C水浴箱消化，每30rain轻轻摇荡一次，4h后消化成絮状； 机制，探讨其治疗骨关节炎的作用机制。 1000