多形汉逊酵母外源基因表达系统.pdfVIP

17卷 3 期 生 物 工 程 学 报 Vol.17No 2001年 5月 Chi- Aurnal了Biomthnolop May Zoo 多形汉逊酵母外源基因表达系统 陈凤菊’，2卢善发” 胡敦孝2 ，(中国科学院植物研究所 北京 100093) ?(中国农、IY.人学植保学院 _It京 100094 摘 要 多形汉逊醉母是 种有很大潜力的外源基因表达系统，己在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来 源于真核生物的外源基因有if多优点 如重组lf5减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加一和修饰、表达量高等。许 多有商业价值的蛋自质在这一系统中得到成功表达 有的已投人市场。本文综述多形汉逊酵母宿主菌的生物学特 性、基因上程操作技术、发酵及外源基因表达等方面的特点和最新进展 关键词 多形汉逊醉毋,甲醇酵母，外源基因表达 中图分类号 Q786 文献标识码 C 文章编号1000-3061(2001)03-0246-04 酵母作为单细胞的真核微牛物，既具原核生物生长快、 甲醛可在甲醛脱氮酶(FMD)和甲酸脱氢酶的作用下进一步 遗传操作简单的特点，又有哺乳类细胞的翻译后加工和修饰 氧化成CO,，也可在_氢丙酮合成酶(UHAS)等的作用下通 功能，用来生产来源丁真核生物的生物活性蛋白有很多优 过术酮糖单磷酸途径生成碳水化合物[fsl成为细胞物质。另 点。酿酒酵母 (s-harornym +r}}i+iaQ)是第一个用于表达外 一产物H,O:则在过氧化物酶的作用下形成H,。和仇。 源基因的真核系统，20年来已成功地用于表达来源于人、动 甲醇代谢途径的关键酶SIOX,FMD和DH.4S的表达受阻 物、植物和病毒的外源基因，1『、但这一表达系统在工业化生 遏/解阻遏机制的调控。乙醇及高浓度的葡萄糖和甘油阻遏 产中存在许多不足，如菌株不稳定、产量和分泌效率低、分泌 墓因表达,FP醇及低浓度甘油(。3%)和葡萄糖(0.1%)能解 的多ftk链常过度糖基化等h7 除阻遏，使相关酶得到一定程度的表达.，1。甲醇是最能解 甲醇营养型酵毋 简称甲醇酵母)是最近十年逐渐发展 除阴遏作用的底物，但以甲醉为唯一的碳源和能源时细胞生 起来的一类可用于表达外源基因特别是真核生物基因的理 K速率较低，外源基因的产量也低 其它碳源如低浓度甘油 想系统。这类酵母分属假丝酵母 (Candia),汉逊酥母(Han- 和葡萄糖，虽然只能起部分解阻遏作用，外源基因的产量有 smzudu),毕赤酵母(Pichia)和球拟fty毋 T‘orulop-)4个属，‘， 时会很高L叫 能在以甲醇为唯一碳源和能源的培养基上生长 与酿酒酵 多形汉进酵母细胞中。MOX,DH4S和过氧化物酶贮存于 母相比，甲醇酵母外源基因表达系统具有重组菌的遗传性质 过氧化物体。细胞以葡萄糖为碳源时，过氧化物体的体积约 稳定、表达量和分泌效率高、适 于大规模发酵等优点。多形 占酵母细胞总休积的了%。细胞以甲醇为碳源时，相关的酶 汉逊酵母(Harveenulapolymorpha)是这类酵母中的佼佼者.是 大量合成，过氧化物体急剧膨胀 其休积可达酵母细胞总休 当前国际匕公认的最为理想的外01基囚表达系统之一，许多 积的so%.}os，此系统表达外源蛋白时.介成的蛋自质可贮 基因包括在其它系统中难以高效表达的荃囚己在其细胞中 存在过氧化物体中，避免对细胞产生毒害且免受蛋白酶降解 得到高效表达L3io因内对多形汉逊酵母的研究才刚刚起步， 2 基因工程操作技术 真正成功表达的还不多。我们曾研究了多形汉逊酵母细胞 脂肪酸的生物合成 刁，并正利用这一系统表达重组水虹索 2.1 表达载体的构建 木文综述多形汉逊酵母表达系统的最新研究结