十全大补配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞细胞周期与细胞凋亡的影响.pdfVIP

LISHIZHEN MEDICINEANDMATERIAMEDlCARESEARCH2011VOL．22NO，6 时珍国医国药2011年第22卷第6期 十全大补配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞 细胞周期和细胞凋亡的影响 石娅萍1，黄茜1，郑轶峰1，祝彼得1，郭巍2 摘要：目的观察十全大补配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓有核细胞的细胞周期、细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影 响。方法采用”Co照射、环磷酰胺、氯霉素注射复合处理建立小鼠骨髓抑制模型后，给予十全大补配方颗粒进行治疗， 采用流式细胞术(FCM)，检测其对骨髓有核细胞的细胞周期和细胞凋亡率的影响；采用免疫组织化学的方法检测骨髓有 向G：／M期转化，升高其增殖指数；抑制骨髓细胞凋亡；上调骨髓Bcl一2蛋白表达，下调Bax蛋白表达下调。结论十全 大补配方颗粒可通过上调Bcl一2蛋白和下调Bax蛋白的表达，抑制骨髓细胞凋亡．提高骨髓细胞增殖指数，从而促进造 血功能的恢复。 关键词：骨髓抑制；十全大补配方颗粒； 细胞周期； 细胞凋亡Bcl—2；Bax DOI标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2011．06．11l 中图分类号：R285．5文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2011)06—1515-02 十全大补汤出自《太平惠民和剂局方》，是在“八珍汤”的基 臼处死小鼠，取出左侧股骨，用1ml生理盐水冲出骨髓细胞，4 础上，加入黄芪和肉桂制成，具有温补气血之功效，临床上常用于 号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液。 000 气血两虚症的治疗。近年来对十全大补汤的药理作用已做了较 2．4细胞周期的分析将上述骨髓细胞悬液离心(1r／min，5 为广泛的研究，然而其对放、化疗所致骨髓抑制作用的机制方面 却未见系统深入的研究。本室前期实验证明，十全大补汤改良剂 细胞，立即混匀，封口膜封口，置4。C冰箱备用。测试时，取上述 型十全大补配方颗粒可促进骨髓抑制小鼠造血功能的恢复，本研 固定的细胞样品，用PBS洗去乙醇，加100 tzlPBS后混匀，加碘化 究在前期实验基础上，主要对十全大补配方颗粒促进骨髓抑制小 丙锭染液(4cC，避光30min)，上流式细胞仪检测细胞周期的变 鼠造血功能恢复的机制进行初步探讨。 化。结果以细胞周期各时相细胞百分率表示，并按公式：PI=(S 1材料与仪器 1．1 liferationlndex，PI)。 动物BALB／c雄性小鼠50只，8～12周龄，体质量18～ 229，四JII大学华西实验动物中心提供(实验动物生产许可证号：2，5细胞凋亡率的测定取上述制备好的骨髓单核细胞悬液离 心(1000 川实动管字09)。 r／min，5 1．2药品、试剂环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司产品；十析，计算凋亡细胞百分率。 2．6细胞凋亡相关蛋白的检测最后1次给药24h后，颈椎脱 全大补颗粒，深圳三九现代中药有限公司提供产品；RNA酶 Roche公司产品；碘化丙啶(PI)，美国Sigma公司产品；Bcl一2多克 隆抗体，Bax多克隆抗体，北京博奥森生物技术有限公司产品；脱钙，常规脱水、透明、浸蜡、切片；按SABC检测试剂盒说明分别 SABC免疫组化检测试剂盒，DAB显色试剂盒，武汉博士德生物 工程有限公司产品。 1．3实验材料和仪器设备”c01源，四川省肿瘤医院提供；电子 分析天平，BP61型，Sartonus，德国；流式细胞仪，ELITEESP型，度复染，脱水、透明、封片镜检，骨髓有核细胞胞质内出现棕黄色 美国BECKMAN—COULTER公司产品。 物质为免疫组化染色阳性产物。PBS替代一抗做阴性对照。每 2方法