水稻功能叶响应光强日变化的差异蛋白组学分析.pdfVIP

水稻功能叶响应光强日变化的差异蛋白组学分析1 林文雄，熊君，余高镜，李兆伟，吴敏鸿，陈婷 福建农林大学农业生态研究所，福州（350002 ） E-mail ：wenxiong181@163.com 摘 要：本研究以常规优质稻佳辐占为材料，应用差异蛋白组学的方法研究在福建光照最强 月份(7 月份)水稻秧苗功能叶响应光强日变化的分子机制，结果表明：共有7 个蛋白质发生 表达丰度的日变化，经质谱分析与功能鉴定，结果预测了6 个蛋白质，它们分别是叶绿体光 合系统 Ⅰ反应中心亚基Ⅱ-类蛋白(1)、核苷单磷酸激酶b(2) 、含Lon 保守区的蛋白酶类蛋白 (3)、推定的还原酶(4)、分子伴侣(5)、和倍半萜环化酶1(6)，其中，除了蛋白点2 、3 在午间 表达丰度增强之外，其余的均下降，揭示了功能叶蛋白质响应光强日变化的分子生态学特性。 关键词：水稻；光抑制；差异蛋白组学 光是驱动光合作用的动力，过高或过低的光强均会导致作物光合能力的下降。长江中下 游地区水稻生育期间常因强光高温而光合作用的光抑制，而且每隔两到三年又会因连绵阴雨 的低光强天气而造成严重的减产（李林等，1995，匡延云等，2004 ）。因此，研究水稻对高 低对光强的适应性，是水稻稳产、高产的关键生理问题（匡延云等，2004 ）。 在晴天，照射在植物叶片上的太阳光的强度，从早到晚是逐渐变化的，与此同时，植物 的光合作用也呈现相应的动态变化，光合日变化是植物维持光合机构内不同组分对环境条件 响应的一种平衡能力（Geiger 等。1994，匡延云等，2004 ）。有关高等植物光合作用日变化 已有不少报道，如光合速率、光合效率、叶绿素、荧光非化学猝灭和叶绿素荧光参数等的日 变化。近年来，季本华等(2000)、焦德茂等(2001、2004) 、匡延云等(2004) 分别研究了水稻 在盆栽或自然条件下叶绿素荧光日变化的光适应特性以及与光合生产力和产量的关系，取得 了一些可喜的研究结果并指出，在中午强光高温条件下，水稻品种的 PS Ⅱ反应中心发生了 可逆失活，这可能是中午发生光合下调的生理原因恣之一。但其更深层次的分子机制还未曾 涉及。本研究拟在前人研究基础上，应用差异蛋白组学的观点和方法研究水稻功能叶对光强 日变化适应的分子机理，以期为以提高光合效率为目标的水稻高产稳产育种提供理论依据。 1. 材料与方法 1.1 供试品种与取样方法 供试水稻的品种为福建省推广的常规优质稻佳辐占。于2005 年7 月在厦门集美科研基 地进行，该基地7 月份日平均气温28.3 ℃，日平均最高温为38.5℃，太阳辐射强度为15.22 千卡/cm2 。种子催芽后采用直播方式进行田间的播种与管理，5 叶期后，定株并标记100 株 秧龄相同，长势相似的秧苗供随机取样。在自然条件下，分别于6 ：00、10：00、12：00、 16：00、17：00、18：00 取同一叶位的功能叶并分别收藏于-80℃冰箱中备用。 1.2 蛋白质的提取与双向电泳 1.2.1 蛋白质提取： 样品提取：用 TCA/丙酮法提取根系蛋白质：取 1g 左右的根系放于研钵中同时加入 1本课题得到教育部生态学博士点基金项目(20050389004) ; 国家自然科学基金）的资助。 -1- 10%PVP，液氮研磨成粉末，加入5mL10%TCA （三氯乙酸：10%纯TCA，90%丙酮，0.07% 巯基乙醇）重悬沉淀，使细胞壁破裂，放在-20℃沉淀过夜，4 ℃下 18000prm 离心30min， 弃上清，沉淀用预冷的丙酮重悬，于-20℃下沉淀 1 小时，4 ℃下 18000prm，弃上清，真空 干燥所得的沉淀，于-20℃保存待用。 样品裂解：称取蛋白质干粉按 15ul/mg 的比例用CHAPS 提取液（9M 尿素，1%二硫苏 糖醇（DTT ），4%CHAPS ，2%Ampholine （pH5-8 ）于超声波清洗器中20 ℃超声处理 10×1.5min， 每次超声处理间隔期间震荡30S，25 ℃12000r