高效液相色谱检查十一酸睾酮其他甾体课件.pptVIP

高效液相色谱检查十一酸睾酮其他甾体 何伟康 陈忠坚 过程 查资料 药典 药物的理化性质，检查方法及具体操作 网络 结构式，功效及一些产品名 文献 同类药物高效液相色谱法的使用情况 分析化学和药物分析教材 高效液相色谱法 实验方案 主成分自身对照法（无杂质对照品） 将供试品稀释成与杂质限度相当的浓度，作为对照溶液。分别取供品试溶液和对照溶液进样，计算供试品溶液色谱图上各杂质峰面积总和，与对照溶液主成分峰面积比较，确定杂质是否超过限量。 供试品溶液配制 取本品约0.1g，精密称定，加入流动相约20ml，溶解，定容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供试品溶液）。 自身对照品溶液配制 精密量取供试品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含0.04mg）。 实验清单 仪器： 高效液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，（柱长？） 乙腈－异丙醇－水（40:40:20）为流动相；检测温度室温，检测波长为240nm。（灵敏度？流速？） 50ml容量瓶×2 1ml移液管 电子天平 小漏斗 250ml 烧杯 50ml量筒 滤纸 洗耳球 方案修改 供试品溶液 2mg ∕1ml 0.5mg∕1ml 自身对照溶液 0.04 mg ∕1ml 0.01mg／1ml 色谱条件的确定 ： 色谱柱：Agilent C185um（150×4.6mm） 流动相的确定：？ 流速：1.0ml／min 灵敏度：0.01档 溶液配置及仪器操作 供试品溶液配置：0.5mg/1ml 精密称定50.0mg 乙腈定容至10ml 移液管移取1.0ml 流动相定容至10ml（乙腈-水=75：25） 自身对照品溶液配制：0.01mg/ml 移液管移取供试品1.0ml 乙腈溶液定容至50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml） 液相色谱仪器操作 开始：装柱 检漏 甲醇冲洗0.5h 流动相冲洗0.5h 设定参数 待基线稳定后进样 结束：用冲柱水冲洗1h 纯甲醇冲洗1h 收好柱子。 药典方法 思考： 1.主成分峰与杂质的分离度不够（1.960） 2.主成分出峰时间太长（21.538min） 乙腈-异丙醇-水（90：5：5） 乙腈：异丙醇：水（85：10：5） 乙腈：异丙醇：水（80：15：5） 第二次思考： 乙腈价格昂贵，毒性大。 而甲醇粘度小，柱压低，价格便宜，适用范围广，常用于色谱分析的流动相，激素类药物中较常用。 药典为什么不用甲醇代替乙腈呢？ 结论 甲醇替代乙腈后分离度较低，柱效有所下降，所以在实验中使用乙腈较为合适。 选取流动相，进行杂质限量检查。 乙腈-异丙醇-水=80：15：5 1.进溶剂 2.进低浓度对照溶液 3.进高浓度供试品溶液 计算及结论 自身对照溶液主峰峰面积：1691935 样品溶液杂质峰总峰面积：666831 样品溶液杂质峰总峰面积＜自身对照溶液主峰 峰面积 即杂质含量＜2.0％，符合规定。 心得： 药典规定的方法可能不实用，需经具体的试验验证 HPLC法的关键是色谱条件的确定 了解实验中常用的仪器和溶剂 做实验要又有耐心和恒心，操作要细致 * 查资料（药典，文献，药物分析及仪器分析课本等） 进行讨论，确定方法，制定仪器清单 实验 成果 实验方案进一步修改 流动相 乙腈-异丙醇-水＝40：40：20下色谱图 主峰 R:1.960 T: 1.258 n:9443 如何改变条件呢？ 流动相配比 5 15 80 3 5 10 85 2 5 5 90 1 水 异丙醇 乙腈 流动相 R: 1.182 T: 1.329 n: 10321 R:3.709 T: 1.834 n: 9309 R: 1.591 T: 1.732 n:10495 13.529 16.129 11.171 出峰时间（min） 10495 1.732 1.591 3 9309 1.84 3.79 2☆ 10321 1.329 1.182 1 n T R 流动相 甲醇-异丙醇-水=90：5：5 R: 1.225 T: 1.338 n: 8099 甲醇-异丙醇-水=80：15：5 R：1.208 T : 1.334 n:8564 溶剂峰 高浓度