RNA干扰的机理及特点.docVIP

RNA干扰的机理及特点 08生科2班：刘小东 指导教师：赵菲仪 （天水师范学院生化学院 甘肃 天水 741001） 摘要: RNAi技术是利用双链RNA降解细胞内同源mRNA而使细胞缺失一定的功能的方法;具有高效性、序列特异性、高稳定性等特点。总共有触发物的加工、目标mRNA的结合、目标mRNA的降解三个主要过程；作为一种基因打靶技术，在细胞功能改造、基因治疗、功能基因组学等方面有着重要的作用。 【关键词】:RNAi;mRNA;过程; 特点;意义； RNA Interference Mechanisms and Characteristics [Abstract]: RNAi technology is the use of double-stranded RNA degradation of cells homologous mRNA leaving the cells missing some function .It is effective, sequence specificity, high stability and other characteristics. There are the three main processes: the trigger processing; the combination of target mRNA target mRNA degradation.As a gene targeting.It is play an important roles in the transformation in cell function, gene therapy, functional gomics and so on. [Key words]: RNAi; mRNA; Process; Features; Significance； RNAi( RNA infterence, RNA 干涉或RNA 干扰)技术是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象,利用内源或外源双链小RNA ( double stranded RNA, dsRNA) 高效、特异性地降解细胞内同源mRNA从而关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程，使细胞靶基因出现缺失的表型。也是有机体防范病毒或转座子诱导DNA突变的一种生理机制,这种现象发生在转录后水平[1], 又称为转录后基因沉默( post transcription-al gene silencing ，PTGS) nature》上报到了对线虫注射外源双链RNA可诱发与该RNA高度同源的基因序列的沉默以来。国外先后报道在水蛙、果蝇、斑马鱼、爪蟾及脊椎动物体内发现有类似的现象[4] ，在植物的研究中也发现dsRNA可以诱导细胞产生反应,将外源性RNA及与其同源的内源基因转录产物降解,以防止转座元插入或病毒整合到基因组中导致有害基因突变,这也是植物抵御病毒入侵的一种防御机制。而在病毒体内也有类似的机制。近年来， RNAi研究和应用达到了前所未有的新高度——从RNAi机制原理、RNAi技术在基因功能研究领域的应用，乃至临床应用等众多领域都有大量突破性成果涌现——RNAi已经成为基因功能研究和基因治疗研究等领域的最热门技术之一，仅仅在首次命名RNAi的8年之后，Andrew Fire和Craig Mello因此荣获2006年诺贝尔生理医学奖。 一 、 RNAi的过程 1.触发物的加工 研究发现双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)是RNAi的触发物，其有一段非互补的区域将互补的两个区域分开，为了形成一定的结构，非互补区至少含有四个碱基[4]。通常是细胞感染病毒复制时RNA合成的中间产物及一些DNA病毒两条互补链转录产物相互结合、褪火的副产物[2] ；他首先引发与之互补的单链RNA(single-stranded RNA,ssRNA)降解。实验室常用cDNA文库技术以其的用途来构建相应的载体，再经过质粒系统进行筛选和序列分析。 2.目标mRNA的结合 在此过程中小分子干扰核糖核酸（short interfering RNA,siRNA）是引物RNA，在此过程中可对目标mRNA起到定位与引导作用。其特征结构为5磷酸基团和3端的羟基，两条链的3末段各有两个碱基突出与末端。而小干扰RNA起作用的关键是双链RNA能与靶mRNA 相互结合。 其有两个来源： (1)Dicer酶切 在RNAi反应过程中，dsRNA被核糖核酶-Ⅲ（Dicer 酶）切割为21～23个核苷酸长度的siRNA，siRNARNA诱导沉默复合体（RNA induced silence comp