氨基荧光素的合成分离和表征潘惠英葛凤燕陈立功(天津大学.pdfVIP

第23 卷第2 期 应用化学 Vol. 23 No. 2 2006 年2 月 CHINESE JOURNAL OF APPLIED CHEMISTRY Feb. 2006 氨基荧光素的合成、分离和表征 潘惠英 葛凤燕 陈立功* （天津大学药物科学与技术学院 天津300072 ） 摘 要 对5-氨基荧光素的合成进行了系统的研究。以4-硝基邻苯二甲酸、间苯二酚、氯化锌为原料合成硝 基荧光素，收率为85. 0% ；再分别采用硫化钠和硫氢化钠混合物，多硫化钠、氯化亚锡、氢气和骨架镍还原所 得硝基荧光素混合物，得到5 （6 ）-氨基荧光素混合物；在质量分数为6% 的盐酸中重结晶分离得到了5 位和 6 位氨基荧光素异构体，其收率分别为39. 6% 和14. 5% 。用荧光分光光度计测定了5-氨基荧光素的荧光强 度、最大激发波长和最大吸收波长。同时用HPLC 检测了产物纯度，产物结构经红外光谱、核磁共振谱、质谱 确证。 关键词 氨基荧光素，硝基荧光素，还原，分离 中图分类号：O626. 2 文献标识码：A 文章编号：1000-0518（2006 ） 02-0193-05 氨基荧光素（aminofluorescein ，简称AF ）是荧光素类染料中重要的荧光探针之一，尽管荧光强度仅 为荧光素的1 / 150，但其衍生物如乙酰氨基荧光素［1］发强烈荧光。氨基荧光素广泛用于重要荧光探针如 ［2 ］ ［3 ］ 异硫氰酸荧光素、马来酰亚胺荧光素 、C12-荧光黄 的合成，而这些荧光探针在蛋白质结构分析鉴 ［15］ ［4 ］ ［3 ］ 定 、核酸和核苷酸分析测定 、生物膜结构以及脂质转运和代谢动力学 研究等领域中都得到广泛 应用。目前，国内关于氨基荧光素以及衍生物的研究报道主要侧重于其在生物分析中的应用，而国外关 于其合成研究的报道较多。主要有高温熔融 ［4 ，5 ，8 ，9 ］ ［6 ］ -还原法 、微波辐射法 等。但高温熔融-还原法存在 酯化产率低，分离纯化困难等问题［10］，且产物纯度不高，从而降低了生物标记的灵敏度，影响了它在生 物分析中的广泛应用。微波辐射法反应时间短，但存在收率低，安全性差等问题［7 ］。本文以4-硝基邻苯 二甲酸和间苯二酚为原料缩合制备5 （6 ）-硝基荧光素混合物，直接还原得到5 （6 ）-氨基荧光素，并利用 其在稀盐酸中溶解性能的差别［13］分离得到5 位和6 位氨基荧光素，对其结构进行了表征，并测定了其 纯度。该方法合成路线比传统酯化分离结晶方法短， 5-氨基荧光素的收率提高了1 倍。 目标化合物合成路线如Scheme 1 所示： Scheme 1 The synthesis of aminofluorescein 2005-04-16 收稿，2005-08-02 修回 通讯联系人：陈立功，男，1962 年生，教授；E-mail ：ligongchen@ tju. edu. cn ；研究方向：药物及其中间体合成 194 应用化学 第23 卷 1 实验部分 1. 1 仪器和试剂 YRT-3 型熔点仪（天津大学精密仪器厂）；BIO-RAD 3000 型红外光谱仪（美国）；970CRT 型荧光分 光光度计（上海分析仪器厂）；BRUKER AV400 型核磁共振仪（