版纳微型猪近交系TNF-α基因mRNA实时荧光定量PCR检测方法建立.pdfVIP

一、大型实验动物资源开发与遗传育种 45 版纳微型猪近交系TNF-a基因mRNA 实时荧光定量PCR检测方法的建立 霍金龙1，李颖2，赵跃3，潘伟荣1，刘丽仙3，霍海龙3，曾养志1 (1．云南农业大学，云南省版纳微型猪近交系重点实验室，昆明650201； 2．昆明医学院，第二附属医院整形外科，昆明650101： 3．云南农业职业技术学院，畜牧兽医系，昆明650212) 【摘要】目的快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因TNF-a的表达情况，构建TNF-a基因及内 PCR,和澳9序鉴定，计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品，进行实时荧光定量PCR，生成标准曲线。结果建 GA川)胁{￡行校正，此方法可为探讨TNF．-ot基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。 【关键词】版纳微型猪近交系；实时荧光定量；TNF-a基因；GA用治基因；基因表达 Establishmentofreal—timefluorescence PCRmethodfor quantitative the ofTNF-amRNAinbanna inbred detectingexpression mini-pig line HUO Yue3，PAN Li．xian3，I-lEO Jin．10n91，LIYin92，ZHAOWei-ron91，LIU Hai．10n93，ZENGYang-zhil Line Yunnan 《1．KeyLaboratory ofYunnanProvinceAgricuBural ofBannaMini-p蟾lnbred 650201．China； Medical 650101； 2．DepartmentofPlasticSurgery,theSecondAffiliatedHospitalofKunmingCollege,Kunming and VocationalTechnical 3．DepartmentofHusbandryVeterinary,YunnanAgricultural College,Kunming 6502121 InordertO areal—time fluorescence methodoffast。sensitiveandreliable [Abstract]Objectivedevelop quantitative detection buildastandard ofhouse and刀岈k thatwas withclinic associated system,thisstudy plasmid keepinggene gene closely diseases．MethodBannaminiinbredSus 4to6 usedtoconstructall totalRNAfrom