减毒沙门氏菌介导t-PA基因在BHK细胞中表达生物学活性检测.pdfVIP

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2015-08-15 发布于安徽
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减毒沙门氏菌介导t-PA基因在BHK细胞中表达生物学活性检测.pdf

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学术年会 T060041 减毒沙门氏菌介导的t—PA基因在BHK细胞中的表达及生物学活性检测杨宁宁李银聚程相朝张春杰吴庭才李小康张明亮李正 (河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003) 引言／目的心血管疾病引发的血栓并发症严重威胁人类的生命与健康，是造成死亡与病残的三大疾病之一。以组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)为代表的第二代溶栓药物，是世界第一个也是目前唯一经美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于缺血卒中的溶栓药物。沙门氏菌以其独特的优势作为细菌载体广泛应用于新型疫苗的研究。本实验通过对减毒沙门氏菌介导的t．PA的原核表达质粒和真核表达质粒在BHK细胞中表达和活性检测，探讨原核和真核质粒携带的外源基因在细胞中的表达和翻译后加工情况，为减毒沙门氏菌作为外源基因的载体可行性提供依据。材料方法根据GenBank人组织性纤溶酶原激活剂的编码序列分别设计2对引物，分别扩增目的基因片段，构将重组菌转染BHK细胞并进行检测。结果活性，且真核表达质粒较原核表达质粒表达的蛋白活性高。讨论利用减毒沙门氏菌作为载体传递DNA是目前基因免疫研究的热点，经基因工程方法使毒力降低且毒力基因发生不可逆的突变，但仍有良好的免疫原性和亲和力。以GFP作为报告基因转染沙门氏菌(包括野生型和减毒型)作为异源蛋白的宿主菌，已有报道。经IPTG诱变后，不同的原核表达质粒在减毒沙门氏菌中都能够表达外源基因。但原核表达质粒中的真核基因在减毒沙门氏菌表达的多肽，是否能粒携带的外源基因经减毒沙门氏菌介导可以在真核细胞中进行表达，原核表达质粒携带的真核基因表达的多肽，真核细胞有一定的翻译后加工能力；真核表达质粒在细胞中能够释放并表达具有活性的蛋白。参考文献(略)