(2012-3-31)高级生物化学-蛋白质性质和分离4.ppt

1. 等电点沉淀和PH控制 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。 不同的蛋白质，具有不同的等电点。在生产过程中应根据分离要求，除去目的产物之外的杂蛋白 2、有机溶剂分级分离法 （1）定义：利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的 溶解度不同而使蛋白质分离的方法，称为有机溶剂 沉淀法。经常使用的有机溶剂是乙醇和丙酮。 （2）作用机理： （1）降低水溶液的介电常数，使溶质溶解度降低； （2）破坏大分子周围水膜，使溶解度降低。 （3）优点： 比盐析法析出的沉淀容易过滤或离心分离，分辨力比盐析法好，溶剂也容易除去。 3、盐溶和盐析 常用的盐：为溶解度大的中性盐，如(NH4)2SO4、NaCl、 MgCl2、NH4Cl、KCl等的饱和溶液 盐溶：低浓度的中性盐在蛋白质分子表面形成双电层使蛋 白质溶解度增加； 盐析：高浓度的中性盐破坏蛋白质分子表面的水化层使蛋 白质溶解度降低，发生沉淀析出。（PH多在PI） 分段盐析：不同蛋白质盐析所需的盐浓度不同，蛋白质溶 液中，逐渐增大盐浓度，不同