LPS致早期新生大鼠脑白质损伤时NF-KB表达与细胞凋亡的关系.pdfVIP

·18 · 黑龙江医药科学 2011年2月第34卷第1期 LPS致早期新生大鼠脑 白质损伤时NF—KB表达与细胞凋亡的关系 聂 晶 ，刘冬焱 ，李 贞 (1．佳未斯大学在读研 究生，黑龙江 佳未斯 154007；2．佳木斯大学附属第一医院儿 内一科 ，黑龙江 佳未斯 154003) 摘要 ：目的：利用早期新生鼠脑 白质损伤的模型，检测 NF—KB在这一损伤 中的表达变化 ，探讨NF—KB在脂 多糖(LPS) 致脑 白质损伤 (WMD)发生中的作用 方法：新生2日龄 Wistar小鼠100只随机分组：对照组和 PVL组 ，每组50Y．。对照组仅给 予生理盐水5．0mg／kg(O．01mL／g)腹 腔注射 ，PVL组给予脂 多糖5．0mg／kg(O．01mL／g)腹腔 注射 。用 HE染色法，免疫组化 方 法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导 的缺 口末端标记法 (TUNEL)观察术后 (1h、6h、12h、24h、48h、72h)脑组织在光镜下观察 皮质 脑组织的病理改变 ，通过免疫组化法测定 NF—KB核阳性 细胞数及用TUNEL法测定凋亡细胞指数 。结果：模 型组 NF— KB阳性细胞数及凋亡细胞指数明显多于对照组，与对照组相 比差异有统计学意义 (P0．01)。结论 ：LPS致早期新生鼠脑白 质损伤后 NF—KB的表达增加 ，细胞凋亡明显，提示NF—KB参与了LPS所致 的WMD，为早期诊断wMD提供 了理论依据。 关键词 ：新 生鼠；脂 多糖 ；脑 白质损伤 ；NF—KB；细胞凋亡 中图分类号 ：R722．6 文献标识码 ：B 文章编号 ：1008—0104(2011)01—0018—02 早产儿脑 白质损伤 (WhiteMatterDamage，WMD)是极 固程序行苏木精染色，显微镜下观察大脑病理变化。 低 出生体重儿脑损伤的主要形式，本病是引起早产儿急性死 1．2．4 NF—KB免疫组织化学染色 亡和慢性神经系统损伤的主要原因之一 。所 以探求临床上安 石蜡切片经常规脱蜡至水并固定。NF—KB一抗选用兔 全 、有效 的治疗方法是 国内外 围产 医学研究的热点 。近年来 抗 NF—KBp65亚单位 的多克隆抗体 (稀释度 1：200)。用 大量研究表明，宫 内感染和炎症反应是导致 WMD的重要 因 SABC法试剂盒按说明书进行操作 ，阳性细胞为核着色，呈 素之一l1]。脂多糖是革兰阴性细菌感染后产生炎症作用 的主 棕黄色 ，每张切片上选择缺血灶周 围6个不连续的高倍镜视 要成分 ，当内毒素入侵时，可 以激活 TLR4一NF—KB而产生 野 (×400)，计数阳性细胞数 ，取其平均值为该张切片的阳性 保护性炎症反应 ，NF—KB是一种多效可诱导 的核转录 因 细胞数。 子 。能调节 多种基因的表达和细胞 因子的产生 ，广泛存在于 1．2．5 Tunel凋亡细胞检测 真核细胞 中。近来研究证实，在神经细胞 中也有 NF—KB的 表达l2]。NF—KB的活化与缺氧缺血性脑损伤有密切 的关 采用 Tunel法原位标记 DNA片段检测凋亡 ，严格按说 系，但在早产儿脑 白质损伤 中研究甚少 。本实验用 LPS腹腔 明书进行操作 。阳性结果为细胞核有棕黄色颗粒 ，在光学显 注射早期新生 鼠，建立早产儿脑损伤 的模型，应用免疫组化 微镜下 ，对各组 Tunel染色切片进行凋亡细胞观察 (×400) 和 Tunel法观察 NF—KB的阳性细胞数和凋亡指数 ，以探讨 计数 6个视野 ，计数平均1．0mm 内凋亡细胞数 为凋亡指数 。 WMD后 NF—KB的表达与细胞凋亡的关系 ，为 WMD提供 1．3 统计