ELISA方法检测人外周血中的IL_18.pdfVIP

科技信息 专题论述 　　　　　　 EL ISA 方法检测人外周血中的IL - 18 河北大学生命科学学院　潘　智　蒋继志　牛建章 [ 摘　要]建立了一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的酶联夹心EL ISA 方法, 可定量检测人外周血中的白细胞介素 ( ) 18 h IL - 18 。将体外重组表达的h IL - 18 蛋白作为抗原免疫新西兰家兔, 纯化兔血清中的抗体 IgG, 用辣根过氧化物 酶(HR P ) 标记, 检测正常人血清样本中的h IL - 18。此方法灵敏度高, 可重复性良好, 且结果数据化。适合于 IL - 18 的 临床定量检测, 为进一步开展研究提供了有力的工具。 [ 关键词]h IL - 18　IgG　EL ISA 　　人 白细胞介素 18 (hum an in ter leuk in - 18, h IL - 18) , 是一 2. 1 h IL - 18 包含体的提取 ( ) 类神经免疫调节细胞因子, 在免疫系统参与应激过程中起着重 将菌体破碎, 沉淀以8 M 尿素 含 0. 5 % 巯基乙醇 溶解, ( ) 要的作用。在多种器官、组织和细胞中都可检测到h IL - 18 的 SD S- PA GE 鉴定上清液 如图1 。8 M 尿素溶解液里含有h IL m RN A , 如胸腺、肝脏、脾脏、肾脏、胰腺 以及活化的巨噬细胞 - 18 的包含体。 等[ 1- 4 ] 。h IL - 18 可增加人体吞噬细胞的数量以及增强它的移 动能力[5- 8 ] , 诱导 - 干扰素( - ) 、粒巨噬细胞集落刺激 IN F 因子(GM - C SF ) 以及 IL - 2 的产生并增强它们的活性, 在抗微 生物感染时起着关键的作用[9- 12 ] 。此外, h IL - 18 还可促进T 细 ( ) [ 13 ] 胞的增殖、增强 细胞的细胞毒性 对靶细胞的杀伤作用 。 N K IL - 18 既可作为一种致炎因子, 又可作为一种强有力的特应 性免疫应答诱导剂, 既是多种免疫性疾病的保护因子, 又是诱发 免疫损伤的致敏因子。 酶联免疫吸附测定(enzym e- link ed imm uno so rb en t a ssay, EL ISA ) 是在免疫酶技术 ( imm uno enzym at ic techn ic) 的基础上 发展起来的一种新型的免疫测定技术。应用该方法检测h IL - 18 国内外均有一些报道。但该方法需要用二硝基氟苯封闭辣根过 氧化物酶( ) 上残留的 和 氨基以避免酶分子之间的大交 HR P 联, 操作繁琐, 效率较低, 且成本较高。本文对该方法进行改进, 在低 值条件下使 氧化 , 从而省去了二硝基氟苯封 pH