多拷贝重组HBsAg质粒的构建及在毕赤酵母中的高效表达.pdfVIP

March No．3 中国生物制品学杂志2008年3月第2l卷第3期ChinJBiologicals2008，V01．21 中国图书分类号Q7澌RYD．2+1文献标识码A 文章编号l伽单55略(加惦)∞尬叮舶 【：预防制品】 多拷贝重组HBsAg质粒的构建及在毕赤酵母中的高效表达 何成蔡蓓蓓楼觉人 【摘要】 目的通过构建多拷贝数表达质粒，获得高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(P／ch／apastor／s)菌株。 15 L规模发酵和纯化，获得纯化rIBAg颗粒，并对表达产物的特异性、免疫原性及表达量与拷贝数问的关系进行分析。结果 多拷贝数重组毕赤酵母的表达产物经ELISA、SDS、Westernblot检测，显示出良好的特异性，电镜观察证明表达产物能够 自发装配成22 疫原能有效刺激小鼠产生保护性抗体。结论含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高毕赤酵母邱＆Ag表达量。 【关键词】乙型肝炎表面抗原；多拷贝数；毕赤酵母 ConstructionofRecombinantPlasmid而th Cassettefor Multi—copyExpression High of inP／ch／a Expression HBsAg pastor／s HE Bei—bei，LOU Institute Cheng，CAI Jue-ren(Shanghaiof 200052，China) Biolo#catProducts，Shanghai ToestablisharecombinantP／ch／a strainwith eassottefor ofHB— 【Abstract】Objective pastor／s multi-copyexpression highexpression 7 ca．$$ette into Insert of 5 V(，ctor．Transformtheconstructed sAg．Methodsmultiplecopiesexpression AOX-HBsAg-Trsinglecopyexpression recombinantwith cfl88ettetoP／ch／a GSI15strain clonesandinoculate plasmidnmlti-copyexpresion pastor／s byelectroporation．sc∞e既lpositive toBMGYrlxdi啪for under of the and induction ion expression methan01．Purifyexpressedproductbyhydrophobicexchangechromatography． The wasfullerscaledtoa15Lfennentation the and of procedure up reactor．Analyzespecificityimmunnogencityexpressedproduct舾well拍 the between leveland number．Results andWesternblotshowedthat with relatiomhipexpressioncopy ELISA，SDSHBO,ggoodspeei- Was