糖络宁对糖尿病大鼠坐骨神经MnSOD%2cCuZnSOD%2cGPx抗氧化酶基因表达的影响.pdfVIP

糖络宁对糖尿病大鼠坐骨神经MnSOD，CuZnSOD，GPx抗氧化酶基因 表达的影响 邹大威1高彦彬1朱智耀2李敏州2马鸣飞2 李步满2李勤2王金羊1赵轩1 1.首都医科大学中医药学院，北京1000692.北京中医药大学东方医院，北京100078 目的：初步探讨中药复方糖络宁改善氧化应激的分子机制。方法： 8周龄雄性SD大鼠 随机选取15只为正常对照组，余大鼠禁食12小时后腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60mg.kg-1建立糖 尿病模型，成功后随机分为模型组 （M组）、糖络宁组 （TLN组）、α-硫辛酸组 （LA组）各15只，连 续给药8周后，采用实时定量荧光PCR(Realtime-PCR)技术检测各组大鼠坐骨神经锰超氧化物歧 化酶(MnSOD)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)基因表达量，动态监 测血糖、冷热刺激反应时间和热痛阈值。结果：STZ建立糖尿病模型后，坐骨神经组织的抗氧化酶 MnSOD，CuZnSOD，GPx基因表达均增加；糖络宁连续给药8周后，冷热刺激反应时间明显缩短(P＜0.05)， 痛阈值明显延长 （P＜0.05），MnSOD， CuZnOD， GPx基因表达量均明显升高(P＜0.05)。结论：糖 络宁能够改善STZ糖尿病大鼠痛觉过敏、感觉迟钝症状，并能通过提高坐骨神经MnSOD，CuZnSOD， GPx基因表达减轻氧化应激。 关键词：糖尿病周围神经病变；MnSODmRNA；CuZnSODmRNA;GPxmRNA;糖络宁；氧化应 激 Mix． Agarose。 1．4仪器Real-TimePCR仪：美国ABI7500。 2方法 2．1模型建立和动物分组8周龄雄性sD大鼠适应性喂养1周后，随机选取15只为正常对照组 60 (CTL组)，余大鼠禁食不禁水12h后，予STZ mg．k94腹腔注射，72h后大鼠禁食8h断尾取血， 测血糖≥16．7mmoi．L-1视为糖尿病模型建立成功，结果45只大鼠造模成功，随机分为模型组(M组) 15只、糖络宁组(TLN组)15只、a硫辛酸组(LA组)15只。 剂量嘁模型组予等量蒸馏水ig。每2周动物称重1次，调整用药量。实验期间自由饮食饮水，连 续给药8周。 2．3热刺激和冷刺激反应时间将大鼠置于大鼠固定器内，暴露整个尾部，静置2min，将大鼠尾部 末端1／3置于(43-1-0．5Fc的恒温水中，立即用秒表计时，记录大鼠第1次甩尾时间，作为大鼠的热 刺激反应时间；以同样方法测定大鼠对(10+o．5)℃冷水刺激的甩尾时间作为大鼠的冷刺激反应时间。 每月测定1次。 2．4痛阈测定在安静条件下，将大鼠置于50。C±O．1℃的自动热板仪上测定痛阈值，大鼠足部接 触热板，受热刺激后大鼠出现舔后足反应，以大鼠从双后足接触热板到出现舔后足的时间，即舔后足的 潜伏期作为疼痛反应指标，即痛阈值。每只大鼠重复测定3次，每次测定间隔时间为5min，取其平均值。 每2周测定1次。 2．5MnSOD，CuZnSOD，GPxlmRNA检测 2．5．1标本采集给药8周后所有大鼠以10％水合氯醛为麻醉剂，根据大鼠体重，按350mg／kg 标准腹腔注射麻醉，待大鼠熟睡后，剖开大鼠暴露坐骨神经，迅速取下坐骨神经，用预冷的生理盐 水洗去血渍和杂质，用滤纸吸干后，迅速放入冻存管中在．196℃液氮中保存，待用。 Premier 5．0软件设计合成。 2．5．3总RNA提取采用Trizol法，取大鼠坐骨神经100 Trizol mg，放入液氮中研成粉末，加入lmL 提取RNA。 2．5．4 RNA的体外反转录在0．5mL的离心管中加入RNA 3pL，Oligo(dT)1pL,ddHzO(DEPC处 min，然后迅速放在冰上。然后加入5XBuffer5 理)9．5pL，以上首先70℃孵育5