细胞因子在尘肺病中的表达及其意义.pdf

整捌占芏2篮盛鲤土星业主j幺塞 自B胞国_E=＆尘齄强仝酸麦盐丑基重黑 细胞因子在尘肺病中的表达及其意义 郑州大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室 郑州450001 中文摘要 背景与目的 严重，而且对其尚无有效的治疗手段。通过研究，筛选出能够反映接尘工人暴露 及效应的生物标志物，对于接尘工人豹早期预警、健康监护及生物监测，提高尘 肺病的预防控制水平，具有重要的实际意义。 大量资料表明，多种细胞因子参与了纤维化的发生、发展过程，其中转化生 长因子B factor 1(uaasforminggrowth betal。TGF-B1)、血小板源性生长因子 derived lissue (plateletgrowthfaetor,PDGF)和结缔组织生长因子(connectivegrowth faotor,CTGF)等对调控肺成纤维细胞的分裂、增殖及胶原蛋白的合成与降解起着 十分重要的作用。 TGF-fll是一类多效性多肽，其生物学活性十分广泛，主要促进间质来源细 胞的增殖、分化和移行等功能，如促进成纤维细胞增殖，增加成纤维细胞分泌纤 粘素和胶原等细胞外基质等。它既能正调控又能负调控细胞的增殖、分化和凋亡 等生物过程。TGF-I]I参与纤维化过程的发生已经明确，其中包括肝纤维化、肺 纤维化、肾纤维化、皮肤纤维化等，且研究者所在研究小组发现TGF．B1与煤工 尘肺的发生发展可能有着密切的关系；CTGF的表达在多种纤维化疾病中有上调 现象，可能仅次于TGF．B1的产生量。ID．kill611K等在大鼠创伤愈合模型实验中发 现，原位杂交实验结果表明成纤维细胞样细胞高表达CTGF：该大鼠创伤敷合模 型实验结果表明CTGF的表达和TGF．B1、PDGF一起在创伤愈合过程中部是上 关；另在肾小球体外实验中TGF．B1通过Smad2信号传导通路来调节CTGF的表 达．这些研究都提示TGF．B1、CTGF和PDGF三者在纤维化发生发展过程中有 着一定的相关关系。TGF．0l在以往的器官纤维化中已经研究较多，与尘肺病关 强纽去芏蛰业量亟±．生些生{幺窑蟹盟国王正尘睫蠡圭垃垂盐屋茎蠡望 系的也有一定研究，但具体的作用机制不清楚。丽CTGF和PDGF与器官纤维化 的关系有一定的研究，但其与尘肺病的关系尚未见报道。 此研究通过动物实验和人群调查研究两个方面，采用RT-PCv4revcrse chain linked Iranscription-polymerasereaction)、免疫组织化学和ELISA(enzyme ／mmunosorbent assay)等技术，从基囡及其蛋白两个层次同时来观察分析CTGF、 frGF．B1和PDGP三个细胞园子在尘肺病发生发展过程中的表达水平及其意义， 探讨细胞因子在尘肺发病中的作用和机制，为研究尘肺的接触和效应生物标志物 提供理论依据，为进一步改进尘肺病的预警和健康监护提供可能的理论依据。 1CTGF、TGF-e1和PDGF在大鼠尘肺组织中的表达水平及其意义 1．1实验模型的建立：选用河南省实验动物中心提供的SPF健康成年SD大鼠40 只，合格证号为豫动字410117号，体重185～2129，健康状况良好，随机将动物 分为实验组和对照组。用准备好的石英粉尘悬液采用支气管灌注法进行动物实验 模型的制备。大鼠染尘后4s天处死，剪下肺脏，用生理盐水冲洗干净，大部分 放入液氮罐保存，小部分用体积分数为10％的中性福尔马林灌注固定。 1．2实验方法： 采用提总RNA试帮盒提取大鼠肺组织标本RNA，透过l％琼脂祷凝胶电泳 及RNA的OD值评估RNA的含量和纯度；使用上海生工生物工程技术服务有 13-actin检测逆转录效果；采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别对动物实验组中 的实验组和对照组中大鼠体内CTGF、TGF-B1和PDGF的基因表达量和三种基 因编码蛋白表达量进行分析：统计学分析中数据以譬±s袭示；两组间比较采用 独立样本l检验，3个细胞因子间相关